国家自然科学基金(31060209)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- 动态高压微射流诱导的去折叠胰蛋白酶结构预测被引量：2
- 2013年
- 采用差示扫描量热法和圆二色谱分析了动态高压微射流处理前后胰蛋白酶结构的变化,结合前期研究中动态高压微射流诱导的去折叠胰蛋白酶构象的表征,通过PyMOL、3DSMax等软件分别对天然胰蛋白酶和动态高压微射流诱导的去折叠胰蛋白酶的三维空间构象进行模拟和预测,结果表明:与天然胰蛋白酶相比,动态高压微射流处理后胰蛋白酶热焓降低,二级结构构象单元百分含量发生变化,去折叠胰蛋白酶结构更加松散。模拟的胰蛋白酶分子构象示意图更直观地显示了胰蛋白酶的活性中心、二硫键以及二级结构信息,对动态高压微射流诱导的去折叠胰蛋白酶三维结构模型变化做一初探。
- 张兆琴刘伟刘军平邹立强刘成梅
- 关键词：胰蛋白酶去折叠
- β-环糊精衍生物修饰对去折叠胰蛋白酶酶学性能的影响
- 2015年
- 为了改善天然胰蛋白酶和去折叠胰蛋白酶的酶学性能,采用单-6-脱氧-6-胺基-β-环糊精(CDAN)对它们进行修饰,研究CDAN对它们的相对活性、动力学参数、热稳定性、自溶性及在尿素溶液中稳定性的影响。结果显示:CDAN修饰明显降低了天然和去折叠胰蛋白酶的米氏常数并提高了它们的催化效率,其中去折叠胰蛋白酶的变化最显著(p<0.05),修饰前后去折叠胰蛋白酶的Km值分别为0.35×10-3mol/L和0.11×10-3mol/L。修饰的天然胰蛋白酶在60℃保温10 min时,相对活性由修饰前的2.1%上升至58.3%,而修饰的去折叠胰蛋白酶则从修饰前的19.5%上升至70.5%;在尿素溶液中处理60 min时,修饰前后天然胰蛋白酶的相对活性分别为11.3%和78.8%,而去折叠胰蛋白酶分别为21.3%和84.9%。表明CDAN修饰改善了胰蛋白酶的热稳定性、抗自溶能力以及在尿素溶液中的稳定性,其中去折叠胰蛋白酶的改善效果比天然胰蛋白酶的更好。
- 刘军平童桂鸿刘伟邹立强钟娇刘翔宇张怡
- 关键词：Β-环糊精胰蛋白酶
- 尿素对经动态高压微射流(DHPM)诱导去折叠胰蛋白酶构象变化的影响
- 2011年
- 以牛胰蛋白酶为原料,通过紫外吸收光谱、荧光发射光谱和圆二色谱研究尿素对天然胰蛋白酶和经动态高压微射流(DHPM)诱导去折叠胰蛋白酶的构象变化。结果显示:天然胰蛋白酶构象在尿素浓度4.0～6.0mol/L之间变化最显著,紫外吸光度从0.2746降至0.1824,吸收峰从波长279nm红移至283nm,相对荧光强度从105.9降至98.27,发射峰从波长352nm红移至355nm,β-折叠含量从46.9%降至30.6%;而去折叠胰蛋白酶构象在尿素浓度2.0～4.0mol/L之间变化最显著,紫外吸光度从0.3121降至0.2159,吸收峰从波长281nm红移至283nm,相对荧光强度从108.24降至99.07,发射峰从波长353nm红移至360nm,β-折叠含量从40.6%降至38.9%。表明尿素对经DHPM处理后处于部分去折叠胰蛋白酶构象的影响更为显著。不同浓度尿素导致胰蛋白酶产生不同构象的中间体,表现出"熔球态"模型特征。
- 刘军平刘伟邹立强刘成梅方丽淳张兆琴
- 关键词：尿素胰蛋白酶构象
- mPEG-SS修饰对DHPM去折叠胰蛋白酶相对活性、热稳定性和动力学参数的影响被引量：2
- 2011年
- 采用ω-琥珀酰酯酸琥珀酰亚胺酯活化的α-甲氧基-聚乙二醇(mPEG-SS),修饰经动态高压微射流(Dynamic high-pressure microfluidization,DHPM)诱导的去折叠态(unfolding)胰蛋白酶,研究经mPEG-SS修饰后其相对活性、热稳定性、动力学(米氏常数Km、最大反应速率Vmax)变化情况。结果表明:经mPEG-SS修饰后,天然态和去折叠态胰蛋白酶的相对活性都没有明显改变;修饰后去折叠胰蛋白酶(DTP)较天然胰蛋白酶(NTP)的耐热性有明显提高,当温度为55、45℃条件下保温180min,NTP和DTP的相对活性分别提高了2%、7%和19%、30%;经mPEG-SS修饰后天然胰蛋白酶和去折叠胰蛋白酶的Km分别为4.67、3.24mg/mL,Vmax分别为0.042、0.034U/min,均比未经修饰的要小。修饰后去折叠胰蛋白酶(DTP)的Km比天然胰蛋白酶(NTP)小,表明修饰后去折叠胰蛋白酶比修饰后天然胰蛋白酶具有更强的与底物(酪蛋白)的亲和能力。
- 邹立强刘伟刘军平刘成梅
- 关键词：胰蛋白酶热稳定性动力学参数
- 柠檬酸对多酚氧化酶相对酶活性、动力学和褐变参数的影响被引量：9
- 2012年
- 以蘑菇多酚氧化酶(PPO)为原料,研究不同浓度的柠檬酸处理对PPO相对酶活性、动力学参数(米氏常数Km、最大反应速率Vmax)、褐变测量参数的影响。结果表明:随着柠檬酸浓度的增加,PP O的相对酶活性逐渐降低,当柠檬酸浓度达到70mmol/L时,PPO的相对酶活性仅为原酶活性的1%;随着底物邻苯二酚浓度的增加,柠檬酸处理的PPO反应速率逐渐提高,当邻苯二酚浓度为15mmol/L时,反应速率达到最大值。随着柠檬酸浓度的增大,PPO的Km基本不变,而Vmax逐渐降低,经Lineweaver-Burk作图得出0、20、40mmol/L柠檬酸处理PPO的Vmax分别为578.4、437.8、111.6U/min。表明柠檬酸是PPO与底物邻苯二酚反应的非竞争抑制剂。对褐变测量参数影响表明,随着处理的柠檬酸浓度的增大,L*(亮度)、a*(红值)变化较小,而b*(黄值)急剧下降,40、70mmol/L柠檬酸处理后b*分别降为原酶活性的57.5%和13.7%;Hue、Chroma、褐变指数(BI)也明显降低;这与PPO的相对酶活性和Vma x变化一致,表明相对酶活性、Vma x与b*、Hue、Chroma、BI有直接的相关性。
- 邹立强刘伟刘军平刘成梅
- 关键词：柠檬酸多酚氧化酶动力学参数
