刘伟
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- FOXO4在甲状腺癌中的表达及其对上皮间质转化的影响
- 2022年
- 目的探究FOXO4在甲状腺癌中的表达及其对上皮间质转化的调控作用。方法通过基因表达谱交互分析(gene expression profiling interactive analysis,GEPIA)、Ualcan、cBioportal等数据库分析FOXO4在甲状腺癌和正常组织中的表达,以及与不同临床分期、患者预后、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的相关性;采用Western blot和PCR技术检测甲状腺上皮Nthy-ori-3-1细胞以及甲状腺癌TPC-1和BCPAP细胞内FOXO4的表达水平。通过DNA转染技术构建过表达FOXO4的甲状腺癌TPC-1/FOXO4及其对照TPC-1/vector细胞系,并采用Western blot和PCR技术检测TPC-1/FOXO4和TPC-1/vector细胞系内FOXO4、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平。最后采用细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测甲状腺癌TPC-1/FOXO4和TPC-1/vector细胞内划痕爬行距离和细胞侵袭迁移数目。结果相较于癌旁正常组织,FOXO4在甲状腺癌组织中呈低表达,且差异有统计学意义(P<0.01);但FOXO4在甲状腺癌不同临床分期组间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。数据库分析也显示甲状腺癌中FOXO4的表达与E-钙黏蛋白呈正相关关系(P<0.05)。体外实验显示,甲状腺癌TPC-1和BCPAP细胞内FOXO4的表达显著低于甲状腺上皮Nthy-ori-3-1细胞(P<0.001);且过表达FOXO4能够上调甲状腺癌TPC-1内E-cadherin的蛋白表达,同时下调N-cadherin的表达(P<0.001)。此外,FOXO4的过表达能够抑制甲状腺癌细胞的侵袭和迁移。随后的数据库生存分析显示,FOXO4的差异表达与甲状腺癌患者的总体生存期、无病生存期均无明显相关(P>0.05)。结论FOXO4在甲状腺癌中呈低表达,与E-钙黏蛋白的表达呈正相关。且FOXO4能够抑制甲状腺癌细胞的上皮间质转化及侵袭迁移能力。
- 寇博孙晓鹏孙晓鹏
- 关键词：甲状腺癌数据库分析上皮间质转化E-钙黏蛋白
- 基于Cancer Browser数据库分析促癌基因HMGA2在肾癌中的表达及其临床意义
- 2019年
- 目的探究HMGA2基因在肾癌中的表达及其对上皮间质转化的影响。方法通过Cancer Browser数据库检测HMGA2的表达与肾癌TNM分期、Staging分期的相关性,并明确HMGA2与Zeb1、Zeb2在肾癌中的相关性;随后通过Western blot实验和实时定量PCR检测HMGA2在肾癌组织、癌旁正常组织、肾癌细胞系以及正常肾小管上皮细胞内的蛋白及mRNA表达水平;通过Cancer Browser数据库检测HMGA2与Zeb1、Zeb2在肾癌中表达的相关性,并通过Western blot实验检测肾癌组织与癌旁正常组织、肾癌细胞786-O与正常肾小管上皮细胞HK2中Twist1、Twist2、Zeb1、Zeb2、HMGA2的蛋白表达水平;最后通过Western blot实验和实时定量PCR检测敲低HMGA2后肾癌细胞786-O内Twist1和Twist2的表达水平。结果随着肾癌的TNM分期以及Stage分期的逐渐增高,HMGA2的表达亦显著增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。而HMGA2在肾癌组织及细胞内的表达显著高于癌旁正常组织及正常肾小管上皮细胞(P<0.001);不管在肾癌组织还是在肾癌细胞内,HMGA2与Twist1、Twist2均呈高表达,而Zeb1和Zeb2的表达无明显变化(P=0.3137,0.5820)。而Western blot和实时定量PCR结果显示敲低HMGA2可下调肾癌细胞内Twist1和Twist2的蛋白和mRNA表达水平。结论HMGA2与肾癌的TNM分期和Stage分期呈正相关。而HMGA2在肾癌组织及细胞内呈高表达,且HMGA2可正向调控Twist1和Twist2的表达。
- 刘伟寇博
- 关键词：肾细胞癌HMGA2TWIST1
- 基于Cancer Browser数据库分析HMGA1在肾癌中的表达及预后被引量：1
- 2020年
- 目的明确HMGA1基因在肾癌中的表达差异及其对上皮间质转化、预后的影响。方法利用Cancer Browser数据库检测HMGA1基因表达与肾癌分级分期、预后的相关性。通过Western blot实验检测HMGA1在肾癌组织、癌旁正常组织、肾癌细胞以及正常肾小管上皮细胞内的蛋白表达。通过Cancer Browser数据库检测HMGA1与Twist1、Twist2在肾癌中的相关性,并通过Western blot实验检测肾癌ACHN细胞系以及肾小管上皮细胞HK2内HMGA1、Twist1、Twist2的蛋白表达。结果 HMGA1的基因表达与肾癌的Grade分级、Stage分期、TNM分期呈正相关,且差异有统计学意义(P<0.05)。而HMGA1在肾癌组织中的蛋白表达显著高于其在癌旁正常组织内的表达,且肾癌细胞中HMGA1的蛋白表达也显著高于其在肾小管上皮细胞内的表达。肾癌患者中HMGA1与Twist2的表达呈正相关(P<0.000 1),而与Twist1的表达无明显相关(P=0.752 6),Western blot结果亦提示HMGA1和Twist2蛋白在肾癌细胞内均呈高表达,而Twist1在肾癌细胞及肾小管上皮细胞内表达无差异。最后的生存分析显示,HMGA1高表达的肾癌患者生存期显著低于HMGA1低表达的(P=0.007 7)。结论 HMGA1可能是肾癌诊断和预后的一种潜在生物学标志物,而高表达的HMGA1与肾癌患者的不良预后有关。
- 刘伟周劲松寇博
- 关键词：HMGA1TWIST1预后
- PAK1基因3′-UTR区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的针对人p21小GTP酶活化激酶1(p21-activated kinase-1,PAK1)基因的3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)构建PAK1的荧光素酶报告基因载体,并对其进行鉴定和筛选,为后续PAK1与microRNA-145(miR-145)的功能和机制研究提供实验基础。方法用PCR法扩增出PAK1基因3′-UTR片段,经连接、酶切插入到pGL3载体上,构建了PAK1 3′-UTR荧光素酶报告基因载体。通过生物信息学方法预测miR-145可能靶向作用于PAK1基因的3′-UTR,后将上述重组质粒以及miRNA mimics(miRNA模拟物)、miRNA-Con(miRNA control,miRNA阴性对照)瞬转到膀胱癌T24和J82细胞系中,并检测其相对荧光素酶活性。另外,利用实时定量PCR法检测不同实验组中PAK1的表达情况。结果成功构建了重组pGL3-PAK1 3′-UTR WT质粒,并通过双酶切以及测序的方法验证所得结果的正确性。且转染pGL3-PAK1 3′-UTR WT质粒后,T24/miR-145组和J82/miR-145的相对荧光素酶活性显著低于T24/miR-con和J82/miR-con组,差异有统计学意义(P<0.05)。另外,通过实时定量PCR法发现,miR-145mimics组的PAK1表达水平显著低于miR-145con组。结论成功构建了PAK1基因3-UTR区荧光素酶报告载体,且miR-145能够显著降低其荧光素酶活性,提示miR-145能靶向负调控PAK1的表达。
- 刘伟寇博贺大林郭鹏
- 关键词：荧光素酶报告基因
- Salen-Mn通过阻滞TGF-β/Smad2信号通路抑制肾细胞癌786-O细胞的侵袭迁移被引量：3
- 2018年
- 目的探讨TGF-β/Smad2信号通路在锰-双希夫碱复合物(Salen-Mananese,Salen-Mn)抑制肾细胞癌侵袭转移中的作用。方法 MTT法检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞的细胞活性影响。用伤口愈合实验和Transwell侵袭迁移实验检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞的侵袭迁移能力。用Western blot以及real-time PCR检测Salen-Mn对肾细胞癌786-O细胞内上皮间质转化相关蛋白标志物(E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Snail)的表达。通过Western和siRNA转染技术检测TGF-β/Smad2信号通路在Salen-Mn对EMT调控中的作用。结果 Salen-Mn可以抑制肾细胞癌786-O细胞的增殖和侵袭迁移(P<0.05)。与此同时,Salen-Mn能在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达,并下调N-Cadherin、Vimentin和Snail的表达(P<0.05)。Western blot结果显示,Salen-Mn能够抑制肾细胞癌786-O细胞内TGF-β和p-Smad2的表达,且TGF-β的过表达能够逆转Salen-Mn对EMT和侵袭迁移的抑制。结论 Salen-Mn通过下调TGF-β/Smad2信号通路抑制肾细胞癌的侵袭转移,这为肾细胞癌的临床治疗提供了一定的理论依据。
- 寇博寇青山刘伟
- 关键词：肾细胞癌TGF-ΒEMT
- LKB1在甲状腺癌中的表达及其对甲状腺癌细胞血管生成的影响
- 2022年
- 目的探讨甲状腺癌组织中肝激酶B1(LKB1)的表达及其与临床病理特征的关系,并探究LKB1过表达对甲状腺癌K1细胞血管生成的影响。方法采集手术治疗的甲状腺癌患者肿瘤组织及癌旁正常组织标本50例,免疫组化法检测甲状腺癌组织及癌旁正常组织中p-LKB1的表达,并比较甲状腺癌患者临床病理指标不同亚型间p-LKB1表达的差异。通过DNA转染技术构建过表达LKB1的甲状腺癌K1/OE-LKB1及其对照K1/NC细胞系,Western blot和ELISA法检测过表达LKB1的甲状腺癌K1/OE-LKB1及其对照K1/NC细胞内血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达及分泌水平;小管形成实验和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)迁移实验分别检测甲状腺癌K1/OE-LKB1及其对照K1/NC细胞内新生小管的数目、HUVEC细胞迁移数目的差别,进而探究LKB1对甲状腺癌K1细胞血管生成的影响。结果甲状腺癌组织中p-LKB1的表达低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。p-LKB1在肿瘤大于1 cm、有包膜侵犯、合并淋巴结转移的甲状腺癌患者中呈低表达(P<0.05)。成功构建过表达LKB1的甲状腺癌K1/OE-LKB1细胞模型,与K1/NC细胞比较,甲状腺癌K1/OE-LKB1细胞内VEGFA的表达及分泌水平显著降低(P<0.05)。此外,相较于K1/NC细胞,甲状腺癌K1/OE-LKB1细胞内新生小管数目和HUVEC细胞迁移数目均显著下调(P<0.05)。结论LKB1在甲状腺癌组织中呈低表达,且与患者的临床病理特征密切相关;此外LKB1具有抑制甲状腺癌血管生成的能力。
- 寇博石玉晗刘伟
- 关键词：甲状腺癌血管内皮生长因子A血管生成
- salen-Mn通过LKB1/AMPK信号通路抑制膀胱癌T24细胞的上皮间质转化被引量：4
- 2018年
- 目的观察LKB1/AMPK信号通路在salen-Mn(salen-mananese,锰-双希夫碱复合物)抑制膀胱癌细胞上皮间质转化过程中的作用。方法 MTT实验检测salen-Mn对膀胱癌T24细胞的活性影响,伤口愈合实验和Transwell侵袭迁移实验检测salen-Mn对膀胱癌T24细胞的侵袭迁移能力,Western blot以及real-time PCR检测salen-Mn对膀胱癌T24细胞内上皮间质转化相关蛋白标志物(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达,通过Western blot和siRNA转染技术检测LKB1/AMPK信号通路在salen-Mn对EMT调控中的作用。结果 salen-Mn能够抑制膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭迁移(P<0.05)。与此同时,salen-Mn能在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达,并下调N-cadherin和Vimentin的表达(P<0.05)。Western blot结果表明salen-Mn可以上调膀胱癌T24细胞内p-LKB1和p-AMPK的表达。LBK1的敲低可以逆转salen-Mn对EMT和侵袭迁移的抑制。结论 salen-Mn通过上调LKB1/AMPK信号通路抑制膀胱癌细胞的上皮间质转化。
- 寇博刘伟寇青山
- 关键词：膀胱癌LKB1上皮间质转化
