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尼帕病毒Taqman qRT-PCR检测方法的建立被引量：4: 2020年; 尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-PCR检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针对尼帕病毒N基因保守区域设计引物和探针,建立Taqman qRT-PCR检测方法,评价该检测方法灵敏度、特异性和可重复性,并应用此方法进行样本检测。本研究建立的Taqman qRT-PCR检测方法可以特异性的检测尼帕病毒,检测灵敏度为10~2拷贝/μL,标准曲线线性范围为1.0×10~9~1.0×10~2拷贝/μL,可重复性较好,能够有效检出尼帕病毒马来西亚病毒株和孟加拉病毒株,可用于样本尼帕病毒的检测及定量。; 王浩麻粉莲王超黄益曼郭琼郑丽舒; 关键词：尼帕病毒核酸检测

临床样本A亚型人呼吸道合胞病毒二代测序全基因组特征分析: 2020年; 目的分析北京市一株人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)A亚型全基因组序列的变异和遗传特征。方法对北京友谊医院住院儿童鼻咽抽吸物样本核酸进行二代测序,获得了一株HRSV A亚型全基因组序列,与其他相关参考株构建系统发生树,并对主要蛋白编码区进行同源性分析、单核苷酸多态性分析以及N-糖基化位点预测。结果系统发生树和同源性分析结果提示,本研究获得的HRSV病毒株(RSVA/Beijing-China/2017)属于A亚型ON1基因型。核苷酸和氨基酸变异分析表明G蛋白、F蛋白和L蛋白变异性较大。氨基酸变异位点分析显示G蛋白第142位发生了氨基酸替换(L142S)。F蛋白P27肽中(110-136aa)有一处氨基酸替换(S105N),在抗原位点Ø(62-69aa和196-210aa)中也发生了氨基酸替换(C69Y)。N-糖基化位点预测发现该毒株的F蛋白N-糖基化位点有5个,G蛋白N-糖基化位点有4个。结论本研究所得的HRSV毒株属于A亚型ON1基因型,G蛋白、F蛋白和L蛋白变异较大,G和F蛋白共发生22处氨基酸替换。; 郭琼王超黄益曼张骞王浩麻粉莲郑丽舒; 关键词：呼吸道感染全基因组

笼型蛋白仿生纳米结构构建及抗病毒研究: 2023年; 本研究利用笼型铁蛋白亚基的解聚和自组装过程,在蛋白酶促活性位点上仿生合成1~3 nm尺径可控的金纳米团簇,构建了新型高生物活性抗病毒纳米药物Au@HFn,使用多种电镜学方法对其形貌、结构进行了表征;在抗病毒功效方面,Au@HFn具有抑制HepG 2.2.15细胞HBV s/e抗原分泌和降低HBV核酸复制的效果,抑制效果随金团簇尺径增加而提高并与纳米药物的浓度呈正相关;在细胞毒性实验测试中,Au@HFn未发现有细胞毒性,且增高了细胞活力,具有很高的生物安全性。本研究提出了一种新的抗病毒纳米药物构建策略,相对传统小分子抗病毒药物,在提高药物生物兼容性、降低毒副作用和抗耐药性等方面具有较大的潜力和应用前景。; 袁嫕王超郭琼王刚谢志萍段招军郑丽舒; 关键词：仿生合成抗病毒

新型冠状病毒614D和614G假病毒生物学特性研究: 2022年; 目的利用HIV慢病毒包装系统构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)原始株614D和突变株614G假病毒,并初步研究其生物学特性。方法将重组表达质粒pCDNA3.1-614D和pCDNA3.1-614G分别与慢病毒质粒psPAX2和pLenti CMV Puro LUC瞬时共转染293T细胞,72 h后收集上清,进行20%蔗糖垫层超速离心,检测假病毒的滴度、形态、S蛋白表达和中和活性。结果间接免疫荧光检测可见S蛋白特异性荧光,Western blot分析可见2019-nCoV 614D和614G假病毒S蛋白表达,透射电镜下可见假病毒颗粒具有明显刺突。614D和614G假病毒的滴度分别为1.12×10^(4)和2.52×10^(4) TCID_(50)/ml,均能够中和S蛋白兔多克隆抗体,表明假病毒具有特异性。结论本研究成功构建了2019-nCoV 614D和614G假病毒,为建立基于假病毒的体外中和抗体检测平台奠定基础。; 麻粉莲雒晓艺王超宋敬东谢志萍丛姗姗黄益曼郑丽舒; 关键词：新型冠状病毒假病毒中和活性

寨卡病毒E蛋白在重组杆状病毒中的表达: 2017年; 目的在杆状病毒中表达寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）包膜蛋白（Envelope protein,E蛋白）.方法人工合成ZIKV E基因全长序列（1 518 bp）,并克隆到pFastBac1载体上,得到重组杆状病毒转移载体pFB1-E,转化含DH10Bac感受态细胞,获得骨架质粒rBacmid-E,转染sf9细胞,得到重组杆状病毒rBac-E.检测病毒滴度,PCR法检测E基因的插入,间接免疫荧光和Western blot法检测E蛋白的表达.结果经PCR方法鉴定,重组杆状病毒骨架质粒构建成功,重组病毒rBac-E（第3代）病毒滴度为2.58×105pfu/ml.提取感染rBac-E的sf9细胞基因组,经PCR扩增得到3 830 bp的条带,间接免疫荧光检测出现特异性绿色荧光.Western blot鉴定可见感染重组杆状病毒rBac-E的细胞沉淀中在相对分子质量55×103处有特异性条带.结论在杆状病毒表达系统中重组表达了ZIKV E蛋白,为ZIKV E蛋白功能研究及疫苗的开发奠定了基础.; 高寒春姚立红王超郑丽舒; 关键词：包膜蛋白杆状病毒 SF9细胞

北京地区呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒流行病学和基因进化分析被引量：4: 2022年; 目的分析北京地区呼吸道感染住院儿童人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)的流行病学特征,阐明遗传进化特点。方法采用real-time PCR方法对2017—2019年北京友谊医院呼吸道感染住院患儿的2848份鼻咽抽吸物样本进行HBoV1核酸检测,结合临床信息进行流行病学分析;利用巢氏PCR方法扩增HBoV1的NP1和VP1基因,分析序列同源性;构建VP1的最大分支可信度树和种群进化图,进行时间进化分析。结果2848份样本中检出HBoV1阳性样本90份,感染率为3.16%,5岁以下患儿居多(93.33%,84/90)。HBoV1感染全年可见,10月份病例数最多,检出率为7.23%(18/249)。HBoV1阳性病例多与其他呼吸道病毒混合感染(48.89%,44/90),临床症状多为咳嗽和发热。巢氏PCR扩增获得NP1区序列55条和VP1序列47条,核酸同源性分别为98.9%~100%和99.1%~100%。HBoV1 VP1时间进化分析显示本研究获得的HBoV1基因序列出现在两个进化分支上,HBoV1种群动态平稳。结论HBoV1是导致北京地区儿童呼吸道感染的常见病毒之一,其基因进化相对稳定,但仍需持续监测。; 张骞王超黄益曼麻粉莲郑丽舒; 关键词：呼吸道感染人博卡病毒基因进化

人偏肺病毒在传代细胞和人呼吸道上皮细胞中分离和鉴定被引量：3: 2022年; 人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)是2001年鉴定出的新发呼吸道病毒,婴幼儿、老人和免疫抑制人群易感,引起上呼吸道和下呼吸道感染,目前尚无疫苗和特异性治疗方案。为获得北京地区HMPV临床流行毒株,本研究将经荧光定量PCR检测为HMPV阳性的鼻咽抽吸物样本分别接种LLC-MK2、Vero-E6和分化良好的人呼吸道上皮细胞(Human Airway Epithelium,HAE),观察细胞病变、检测免疫荧光、电镜观察病毒形态、测定病毒滴度及分析复制特点,对分离获得的HMPV分离株进行鉴定。结果表明,HMPV感染LLC-MK2细胞可形成合胞体,但在Vero-E6中多呈单个细胞感染;经免疫荧光检测,HAE、LLC-MK2和Vero-E6细胞均可见绿色荧光;电镜结果可见病毒为近似球型的颗粒,有包膜和刺突,直径约在150nm~200nm之间;HMPV在HAE和LLC-MK2两种细胞上的复制特点基本相同。本研究成功建立了临床样本在LLC-MK2、Vero-E6和HAE分离培养HMPV的方法,分离并鉴定了HMPV临床分离株,为HMPV感染机制的研究奠定基础。; 麻粉莲王超陈爱珺宋敬东谢志萍姚立红郑丽舒; 关键词：人偏肺病毒病毒分离

人偏肺病毒检测方法研究进展被引量：3: 2018年; 人偏肺病毒(hMPV)是2001年在荷兰发现的一种副黏病毒,是婴幼儿、老年人和免疫功能受损患者中急性呼吸道感染的重要病原体。临床症状可表现为轻度上呼吸道感染到严重的下呼吸道疾病,包括细支气管炎和肺炎。实验室对hMPV检测主要采用直接免疫荧光法和RT-PCR法,根据不同的实验需求,需要采用不同的检测方法。本文对hMPV的检测方法进行了综述,以期为hMPV的进一步研究提供基础。; 王超郑丽舒; 关键词：人偏肺病毒病毒分离

北京地区住院患儿WU多瘤病毒感染的流行病学研究被引量：1: 2019年; 自2007年Gaynor A M等人通过高通量测序在肺炎患儿呼吸道样本中发现了WU多瘤病毒(Washington University polyomavirus,WUPyV)以来,WUPyV在世界各地被广泛检出。为了解北京地区急性呼吸道感染住院儿童中WUPyV感染情况及其临床特征,收集北京地区2017年4月至2018年3月共1 276份呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物样本,使用real time PCR方法对样本进行WUPyV检测,同时对WUPyV阳性样本进行17种常见呼吸道病毒筛查。共检出WUPyV阳性样本76份(5.96%,76/1 276),4岁以下儿童居多(92.11%,70/76);WUPyV感染全年可见,无显著季节性;多伴随其他呼吸道病毒混合感染(60.53%,46/76),最常见混合感染为鼻病毒和A型流感病毒;WUPyV单一感染者与混合感染者病毒载量无显著性差异,临床诊断和表现基本一致;WUPyV感染患儿的常见诊断为支气管炎(68.42%,52/76)和肺炎(30.26%,23/76);临床症状主要表现为高热、咳嗽、咳痰。研究结果提示WUPyV是北京地区急性呼吸道感染住院患儿呼吸道样本中常见病毒之一,多见于4岁以下儿童。; 王超麻粉莲高寒春姚立红王浩魏田力郑丽舒; 关键词：流行病学

干扰素α2b和λ1体外抗呼吸道合胞病毒活性研究: 2024年; 目的分析干扰素(interferon,IFN)α2b和λ1在Hep2细胞和人呼吸道上皮细胞(human airway epithelium,HAE)中抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)病毒活性。方法在Hep2细胞中,RSV(MOI=0.01)感染后,加入IFN-α2b或IFN-λ1,48 h后观察细胞病变(cytopathic effect,CPE)、RT-qPCR方法测定病毒载量、免疫荧光法检测RSV F蛋白及结晶紫法检测细胞存活率。在HAE细胞中,用IFN-α2b和IFN-λ1预处理24 h后,RSV(MOI=0.01)感染HAE,RT-qPCR方法测定第1~7天培养上清中的病毒载量,免疫荧光法检测RSV F蛋白及空斑法测定第7天培养上清中的病毒滴度。结果在Hep2细胞中,IFN-α2b和IFN-λ1处理组的CPE较病毒对照组均有所缓解,且均是高浓度组干扰素的CPE轻于低浓度组。不同浓度的IFN-α2b和IFN-λ1均可以显著降低RSV病毒载量(P<0.001),且高浓度组病毒载量明显低于低浓度组(P<0.001)。此外,IFN-α2b和IFN-λ1均能够降低RSV感染后F蛋白表达量,同时提高细胞存活率。在HAE细胞中,IFN-α2b和IFN-λ1均能抑制RSV病毒复制,降低病毒滴度(P<0.001)和降低RSV F蛋白表达量。结论IFN-α2b和IFN-λ1在传代细胞Hep2和HAE中对RSV均有较好抗病毒活性,为干扰素抗呼吸道病毒研究提供了数据参考。; 管恩蕊张骞陈爱珺王超黄益曼麻粉莲郑丽舒; 关键词：呼吸道合胞病毒 IFN-Α2B

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王超

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