刘洋
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：内蒙古民族大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 牛乳源性无乳链球菌菌毛岛屿AP1亚基基因编码产物的抗原性鉴定
- 目的 克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定.方法 根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学...
- 锡林高娃刘洋吴金花布日额
- 关键词：抗原性
- 禽流感病毒A/duck/Fujian/31/2007(H5N1)株M1基质蛋白的原核表达与免疫原性鉴定被引量：1
- 2012年
- 经生物学软件DNAStar分析,参照已发表的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)(H5N1)基因组序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约750bp的M1基因片段,将目的片段定向克隆至pET30a表达载体,经酶切及测序鉴定正确后转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,BCA法测定纯化蛋白的浓度为0.656mg/mL,免疫印迹检测结果表明,纯化的重组蛋白具有良好的反应活性。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测结果表明,重组蛋白可产生抗M1蛋白特异性抗体,具有良好的免疫原性。本研究成功表达了流感病毒H5N1的基质蛋白M1,且重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研制H5N1亚型流感病毒诊断试剂及基因工程疫苗奠定基础。
- 布日额吴金花孙立杰李明刚刘洋刘洋
- 关键词：原核表达
- 牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因的克隆及其表达产物的抗原性鉴定被引量：11
- 2013年
- 目的克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定。方法根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNA MAN,根据其辅助蛋白保守序列设计、合成1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,PCR扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体AP1-pET30,转化大肠埃希菌BL21,并进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。结果克隆的抗原表位序列片段大小为714bp,编码238氨基酸残基,与GenBank公布的AP1(EU929387.1)基因序列相似性为99.72%,氨基酸残基相似性为99.58%。构建的重组表达载体经诱导表达可溶性蛋白,纯化后重组蛋白的纯度>95%,Western blot分析重组蛋白能被牛源无乳链球菌阳性血清识别。结论成功构建了pET-30a-AP1重组表达载体,该载体能可溶性表达重组蛋白,表达产物具有良好抗原反应性,为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定奠定了实验基础。
- 锡林高娃吴金花布日额刘洋刘洋刘燕王学理
- 关键词：抗原性
- 内蒙古中东部地区乳源性大肠埃希菌PCR检测及其耐药性分析
- 2012年
- 目的分离牛乳源性大肠埃希菌(E.coli)并进行PCR检测及耐药性分析。方法根据GenBank上公布的牛源致病性大肠埃希菌基因序列,利用Primer5.0和DNAMAN生物信息学软件,根据该致病菌基因组序列16S～23SrRNA间隔区保守序列设计并合成1对引物,对牛乳中分离的大肠埃希菌进行基因扩增和序列测定,同时利用琼脂平板扩散方法分析阳性菌株的耐药状况。结果大肠埃希菌基因PCR扩增产物为396bp,与预期片段大小相符;测序结果与GenBank上公布的牛源大肠埃希菌(X80731.1)基因序列相似性为97.22%,与标准菌株大肠埃希菌(CVCC247)基因序列相似性为100%。分离菌株普遍对卡那霉素、氧氟沙星、氟哌酸高度敏感,对四环素、氨苄青霉素高度耐药。结论成功分离出牛乳源大肠埃希菌菌株,该组分离菌对四环素和氨苄青霉素高度耐药,为进一步建立牛乳中致病性大肠埃希菌的分子检测方法及指导临床用药提供了依据。
- 刘洋刘洋布日额吴金花郭闯锡林高娃刘燕
- 关键词：大肠埃希菌药物敏感性
- 鹅大肠杆菌性腹泻的研究进展被引量：3
- 2013年
- 大肠杆菌在自然界中广泛分布,本属于人类和大多数温血动物肠道中的正常菌群,但是近年来,发现许多菌株可引起腹泻,甚至死亡.在鹅群中,腹泻性大肠杆菌是急性接触性传染,各种年龄的鹅均能感染,对种鹅的危害尤其严重,可使母鹅产蛋量下降甚至死亡,是严重威胁到养鹅业发展.本文针对鹅致腹泻性大肠杆菌存在现状、毒力病原学特点、流行病学、临床特征等方面的综合比较,进行分析说明,提出合理有效的防御措施,并且对快速检测和治疗鹅腹泻性大肠杆菌进展进行总结,强调在禽类养殖过程中重视对大肠杆菌病的防治.
- 刘洋任晓峰吴金花布日额薛晓阳
- 内蒙古中东部地区乳源性大肠杆菌PCR检测及其耐药性分析
- 目的 分离牛乳源性大肠杆菌（E.coli）并进行PCR检测及耐药性分析。方法 根据GenBank上公布的牛源致病性大肠杆菌（E.coli）基因序列,利用Primer5.0和DNAMAN生物信息学软件,根据该致病菌基因...
- 刘洋布日额吴金花郭闯锡林高娃刘燕
- 关键词：大肠杆菌药物敏感性
- 文献传递
- 牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2012年
- 目的克隆牛乳腺炎金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白基因,并进行序列分析。方法根据Gen-Bank上公布的金黄葡萄球菌弹性纤维结合蛋白N端蛋白(nEBPS)基因的全序列,利用生物学软件Primer5.0和Oligo6.0设计了1对特异性引物,采用PCR方法扩增临床分离株nEBPS基因片段。结果扩增的基因片段长度为720bp,与标准菌株(CMCC26074)的nEBPS基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄葡萄球菌菌株(U48826.2)nEBPS基因相似性为97.36%,核苷酸序列共有19处出现碱基突变。结论成功克隆出牛乳腺炎金黄葡萄球菌SEB基因,为建立快速检测牛乳中金黄葡萄球菌的PCR检测方法奠定了基础。
- 薛晓阳吴金花布日额王学理刘洋刘洋刘洋刘燕锡林高娃孙立杰
- 关键词：金黄葡萄球菌克隆
- 牛乳腺炎无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码抗原表位截短序列表达产物抗原性鉴定
- 目的 本实验通过克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定.方法 根据GENBANK上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白AP1(EU929387.1)基因序列,...
- 刘洋吴金花布日额刘燕锡林高娃王学理薛晓阳
- 文献传递网络资源链接
- 乳源致病性金黄葡萄球菌原生质体膜表面蛋白nEBPS的亚细胞定位研究
- 2014年
- 目的克隆牛乳源致病性金黄葡萄球菌nEBPS基因,经工程菌表达得到其编码抗原纯化蛋白,制备多克隆抗体,采用间接荧光抗体法鉴定nEBPS蛋白。方法设计1对克隆引物,PCR扩增牛乳腺炎金黄葡萄球菌内蒙古分离株EBPS基因序列,构建重组表达质粒,转化工程菌,表达膜表面亚单位蛋白nEBPS,纯化后免疫家兔制备抗nEBPS蛋白抗体,采用间接荧光抗体法对乳源致病性金黄葡萄球菌原生质体膜表面蛋白nEBPS进行亚细胞定位。结果在含25μg/ml Amp、0.015g/ml NaCl的LB液体培养基中成功培养制备了金黄葡萄球菌原生质体。对原生质体细胞(表面)和利用0.02g/ml NaCl高渗溶液裂解原生质体细胞离心获得的细胞膜残片进行间接荧光抗体试验,均出现特异荧光。结论间接荧光抗体试验鉴定nEBPS蛋白为膜表面蛋白,可作为乳及乳制品金黄葡萄球菌检测和制备免疫制剂的靶抗原。
- 吴金花布日额锡林高娃乌日汗薛晓阳刘洋
- 关键词：原生质体间接荧光抗体
