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小麦PDS基因VIGS载体构建体系的优化及验证被引量：3: 2014年; 为在小麦上进行VIGS体系的优化,根据GenBank中公布的小麦PDS基因序列(FJ517553.1)设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆PDS基因片段,以BSMV:γ-2a为原载体,通过酶切将原载体中的2a基因片段替换为PDS基因片段,构建小麦PDS基因的VIGS重组载体BSMV:γ-PDS。经测序确认,其与GeneBank中登录的小麦PDS基因序列同源性为97%。重组载体经本实验室简化改良的方法进行转录模板的处理。与试剂盒所提供的方法相比,本研究将RNA酶孵育处理步骤整合入质粒提取的步骤中,省略了SDS-蛋白酶K孵育处理等步骤,降低了引入新杂质的风险,同时降低了实验成本,节省了时间和精力。体外转录的电泳结果表明,体外转录反应的产物浓度大,条带单一,可用于接种实验。抽穗期小麦穗部接种实验及实时定量PCR的结果均表明,小麦内源PDS基因被有效沉默,证实了优化的重组载体BSMV:γ-PDS体系的有效性,奠定了利用VIGS载体侵染抽穗期小麦体系优化的基础。; 南富波李淼淼王昊龙刘伟李卫华; 关键词：小麦体外转录

小麦SBEⅡa、SSⅡa基因片段的克隆及VIGS重组载体的构建被引量：2: 2013年; 【目的】克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的VIGS重组载体,为在小麦上利用VIGS技术研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。【方法】根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基因序列分别设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa、SSⅡa基因的特异片段。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接用SBEⅡa、SSⅡa基因片段分别将原载体中的PDS基因进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结果】克隆的SBEⅡa和SSⅡa基因片段长分别是178 bp和171 bp。序列分析表明:SBEⅡa基因片段与小麦SBEⅡa(AF286319.1)序列同源性为100%;、SSⅡa基因片段与SSⅡa(AF155217.2)序列同源性也为100%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结论】构建的BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体将为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。; 李淼淼南富波刘伟李卫华; 关键词：小麦

小麦SBEⅡb基因的克隆及其与PDS基因串联VIGS载体的构建被引量：1: 2014年; 为探讨以PDS基因为指示基因利用VIGS技术研究小麦SBEⅡb基因的功能,本研究拟构建小麦SBEⅡb和PDS的双基因串联VIGS重组载体。根据GeneBank中公布的小麦SBEⅡb(AY740401.1)和PDS(FJ517553.1)基因序列分别设计搭桥引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡb和PDS基因的特异片段,利用SOE-PCR技术获得双基因融合片段SBEⅡb:PDS。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接,用SBEⅡb:PDS基因片段将原载体中的PDS基因片段进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。结果显示克隆的SBEⅡb和PDS基因片段长分别是181和190 bp,SBEⅡb:PDS片段长是370 bp。序列分析表明:SBEⅡb基因片段与小麦SBEⅡb(AY740401.1)序列同源性为97%;小麦PDS基因片段与PDS(AF155217.2)序列同源性也为97%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。本研究构建的BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体将在PDS基因的指示下为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡb基因与小麦淀粉合成的关系奠定了基础。; 南富波李淼淼王昊龙韩俊杰刘伟李卫华; 关键词：小麦 PDS VIGS

VIGS技术在禾本科植物中的应用研究进展被引量：8: 2013年; 病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象。近年来在植物基因功能研究中,VIGS技术作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。尤其在禾本科植物基因功能研究中VIGS技术得到了广泛的应用。本文阐述了VIGS技术的发现及作用机制,并重点介绍了在禾本科植物中应用的VIGS载体及功能基因组学研究的应用实例,最后探讨了VIGS技术在禾本科植物中影响沉默效率的因素、局限性及应用前景。; 李淼淼南富波刘伟李卫华; 关键词：禾本科植物 VIGS 功能基因组

啤酒大麦籽粒蛋白质含量基因型与环境效应的研究进展被引量：12: 2004年; 综述了目前国内外啤酒大麦籽粒蛋白质含量的基因型和环境效应研究的进展。内容包括蛋白质含量的遗传模型、一般配合力和特殊配合力 ,以温度、光照、水分、湿度为代表的气象因子和氮肥运筹方式作主导的栽培措施等环境条件对啤酒大麦籽粒蛋白质含量的效应 ,蛋白质含量与其它品质性状之间的相关性 ,生产中降低啤酒大麦籽粒蛋白质的调控措施。; 靳正忠齐军仓曹连莆刘伟李诚; 关键词：啤酒大麦籽粒蛋白质基因型环境效应

改良Trizol法从灌浆期小麦胚乳中提取高质量总RNA的研究被引量：2: 2013年; [目的]在传统的Trizol法基础上进行改良,探索一种适合于灌浆期小麦胚乳高质量总RNA提取的方法.[方法]用改良的Trizol法从花后10、15、20 d的小麦胚乳中提取总RNA,经核酸分析仪及电泳检测其质量,进行RT-PCR扩增小麦SBEⅡa基因片段并测序比对.[结果]OD260/OD280:1.95～1.98,OD260/OD230:2.0～2.25,产率:544.00～645.46 μg/g,表明提取的总RNA浓度和纯度均达到要求.测序及Blast比对表明成功克隆小麦SBEⅡa基因片段.[结论]改良后的Trizol法可以高效的从灌浆期小麦胚乳中提取高质量的总RNA.; 李淼淼南富波刘伟李卫华; 关键词：小麦总RNA提取 TRIZOL法

蒺藜苜蓿子叶节高频再生系统的建立被引量：4: 2008年; 通过直接的芽器官发生途径,建立了蒺藜苜蓿Medicago truncatula子叶节外植体的高频植株再生体系。选用在高达5 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)的种子萌发培养基上生长3 d的蒺藜苜蓿幼苗,制备获得由1片子叶和半个胚轴组成的子叶节外植体。以SH培养基为基本培养基,对不同浓度α-萘乙酸(NAA)和6-BA组合诱导不定芽形成条件进行优化的结果表明,不定芽诱导培养基中仅用浓度为4 mg/L 6-BA的平均不定芽数达到3.56,显著优于与其它生长调节物质组合的处理。; 冯利兴傅力刘伟孙杰陈爱民王彦章; 关键词：蒺藜苜蓿植株再生

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刘伟