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应用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路抑制小鼠SGVHD的发生: 2006年; 目的:探讨抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)诱导中的作用,以阐明SGVHD的发生机制。方法:用致死剂量的X射线照射受体小鼠后,移植同基因骨髓细胞,从移植的当天开始连续21天腹腔注射环孢素A(CsA)诱导SGVHD。于诱导的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻)、组织病理学和细胞因子改变。结果:抗CD137L单克隆抗体治疗组小鼠SGVHD的发生率明显低于诱导组小鼠SGVHD的发生率(25%vs 67%),两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12、IFNγ-、TNF-αmRNA水平较低或检测不到。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路可明显抑制小鼠SGVHD的发生,提示CD137/CD137L信号通路在小鼠SGVHD免疫反应中是较为重要的通路之一。; 刘兴田张利宁王玉坤王群高立芬李娜张刘军莉高飞; 关键词：抗体骨髓移植

CD28噬菌体展示及其生物活性检测: 2006年; 目的以噬菌体展示具有天然结构的人CD28分子胞外区同二聚体,检测其抗原性和生物活性,为CD28拮抗性类肽的筛选奠定基础。方法RTPCR从Jurkat细胞扩增CD28胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1blue,并加辅助噬菌体VCSM13,使CD28胞外区展示在噬菌体表面。以ELISA、流式细胞仪检测噬菌体展示CD28的抗原性和与B71的结合力。MTT法检测噬菌体展示CD28的生物活性。结果成功构建表达人CD28分子胞外区同二聚体的重组噬菌粒载体pComb3HCD28,并以噬菌体展示系统展示CD28分子。ELISA和FCM结果显示,噬菌体展示CD28可与抗CD28抗体特异性结合,也可与Jurkat细胞表面CD28竞争结合抗CD28抗体,具有CD28抗原性。噬菌体展示CD28可与B71特异性结合,也可与Raji细胞表面CD80结合,具有与配体结合能力。体外生物活性实验显示,噬菌体展示CD28可抑制抗CD28抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应。结论利用噬菌体展示系统成功展示CD28同源二聚体,噬菌体展示CD28具有抗原性及生物活性,为以CD28为靶点体外筛选CD28拮抗性类肽,从而防治移植排斥反应和自身免疫病奠定了基础。; 李娜张利宁王群王晓燕石永玉刘兴田高飞孙汶生; 关键词：CD28 噬菌体展示

CD28拮抗性类肽的筛选及其生物活性测定: 目的:CD28-B7是T细胞活化最关键的,研究最清楚的协同刺激通路。阻断CD28-B7通路是治疗自身免疫病及防治移植排斥的重要策略之一。目前阻断协同刺激通路的方法主要是用特异性单克隆抗体封闭,单抗多为鼠源性的,用于人体后...; 李娜张利宁高飞王群; 关键词：CD28 噬菌体展示 GVHD; 文献传递

CD28噬菌体展示载体的构建及鉴定: 2006年; 目的:构建CD28分子胞外区噬菌体展示载体,并对其展示的CD28抗原性进行检测。方法:采用RT-PCR方法扩增CD28胞外区,将其重组于噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体与辅助噬菌体VCSM13共转染受体菌,使CD28胞外区展示在噬菌体表面。用ELISA和流式细胞仪检测展示在噬菌体上CD28的抗原性。结果:成功构建了CD28的重组噬菌体展示载体pComb3HSS-CD28。噬菌体展示的CD28可与抗CD28抗体结合,也可与JurkatT细胞表面的CD28竞争性结合抗CD28的抗体。结论:噬菌体展示的CD28具有抗原性。; 李娜张利宁刘成虎王群高飞; 关键词：细菌噬菌体逆转录聚合酶链反应

小鼠同基因型移植物抗宿主病发生机制及其意义: 2005年; 目的：初步探讨小鼠同基因型移植物抗宿主病(SGVHD)的发生机制,为研究移植物抗白血病效应奠定基础。方法：用同基因骨髓细胞重建致死剂量X线照射的小鼠,用环孢素A(CsA)腹腔注射诱导治疗21d。停药后每日观察小鼠临床症状,在小鼠出现GYHD样症状时,取肝脏、结肠、耳朵、皮肤和胸腺进行组织学检查,并检测肝脏、结肠组织细胞因子和协同刺激分子的表达。结果：67％(19／28)的模型组小鼠产生GVHD样症状,组织病理检查发现GVHD样小鼠结肠和肝脏有组织坏死和大量炎细胞浸润,而移植对照组均未出现GVHD样症状,组织学未见明显异常。R7-PCR检测发现GVHD样小鼠结肠和肝脏组织中共刺激分子CD137mRNA水平和细胞因子IL-12、IFN-Υ和TNF-α mRNA水平较移植对照组小鼠的水平升高。结论：CsA可诱导同基因型骨髓移植小鼠产生GVHD样症状,Th1类细胞因子参与了SGVHD的发生,为进一步研究$GVHD的抗肿瘤机制建立了技术平台。; 刘兴田张利宁王玉坤王晓燕高丽芬王群李娜张蘋高飞; 关键词：细胞因子抗肿瘤

人CD137胞外区噬菌体展示系统的构建及鉴定: 2006年; 目的:以噬菌体展示具有天然结构的人CD137分子胞外区,检测其抗原性和生物活性,为以CD137为靶点体外筛选CD137拮抗性类肽药物奠定基础。方法:PCR方法从CIS质粒扩增人CD137胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1Blue,并加辅助噬菌体VCSM13共感染,使CD137胞外区展示在噬菌体表面。采用ELISA法检测噬菌体展示CD137的抗原性,MTT法检测CD137噬菌体对抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖作用的影响检测其生物活性。结果:成功构建表达人CD137分子胞外区的重组噬菌粒载体pComb3HCD137,并以噬菌体展示系统展示CD137分子胞外区。ELISA结果显示噬菌体展示CD137可与抗人CD137抗体特异性结合,证实CD137分子成功展示于噬菌体表面,且具有抗原性。体外生物活性实验显示,展示在噬菌体表面的CD137可抑制抗CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应,证实噬菌体展示的CD137有与其配体结合的生物活性结构域。结论:利用噬菌体展示系统成功展示CD137胞外区,噬菌体展示CD137具有抗原性及生物活性。; 李娜张利宁王群刘成虎刘兴田; 关键词：噬菌体展示 CD137 抗原性生物活性

噬菌体展示CD28、CD137及生物活性测定被引量：1: 2005年; 目的:以噬菌体展示具有天然结构的人 CD28、CD137分子胞外区,检测其抗原性和生物活性,为 CD28、CD137拮抗性类肽药物的筛选奠定基础。方法:构建 CD28、CD137噬菌粒表达载体 pComb3H-CD28、pComb3H-CD137,以噬菌体展示系统展示 CD28、CD137分子胞外区。以 ELISA、流式细胞仪检测噬菌体展示 CD28的抗原性和与 CD80的结合力,ELISA 检测噬菌体展示 CD137的抗原性,MTT 法检测噬菌体展示 CD28、CD137的生物活性。结果:成功构建重组噬菌粒载体 pComb3H-CD28、pComK3H-CD137,并以噬菌体展示系统展示 CD28、CD137分子。ELISA 结果显示,噬菌体展示 CD28可与抗 CD28抗体特异性结合,也可与 CD80特异性结合;FCM 结果显示,噬菌体展示 CD28可与 Jurkat 细胞表面 CD28竞争结合抗 CD28抗体,也可与 Raji 细胞表面 CD80结合。ELISA 结果显示,噬菌体展示 CD137可与抗 CD137抗体特异性结合。体外生物活性实验显示,噬菌体展示 CD28、CD137可抑制抗 CD28抗体、抗 CD137抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应。结论:利用噬菌体展示系统成功展示 CD28、CD137分子,噬菌体展示 CD28、CD137具有抗原性及生物活性,为以 CD28、CD137为靶点体外高通量筛选CD28、CD137拮抗性类肽奠定基础。; 李娜张利宁高尚先王群刘兴田朱法良郭春; 关键词：CD28 CD137 噬菌体展示生物活性测定淋巴细胞增殖反应体外生物活性

从噬菌体随机肽库筛选CD137结合肽被引量：1: 2005年; 目的应用噬菌体随机七肽库筛选与人CD137特异结合的肽序列。方法以重组人CD137作为筛选分子,对噬菌体展示随机七肽库进行亲和淘选。经过5轮淘选后,共随机挑选23个噬菌斑并对其进行了扩增和测序,据此推导随机多肽的氨基酸序列。经夹心ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与CD137的结合力。3H-TdR法检测了噬菌体展示多肽对抗CD137Ab刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应影响。结果5轮淘选所得的噬菌体回收率逐步提高,显示淘选过程对随机肽库有一定的富集效果。通过对阳性克隆的测序和序列比较分析,得到RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF的相似序列和与CD137L具有同源SRS序列的SRSRVRY、HRRPSRS肽序列,ELISA结果显示这5个克隆都有良好的与CD137的结合力。RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF和SRSRVRY4个噬菌体展示肽均能在体外抑制抗CD137Ab刺激的淋巴细胞增殖反应。结论通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CD137结合的相关多肽,为进一步研究CD137与配体结合的特异性位点及其拮抗性多肽药物设计提供了实验依据和结构基础。; 李娜张利宁王群刘成虎王晓燕; 关键词：CD137 噬菌体随机肽库

重组人白细胞介素18对小鼠骨髓细胞移植后急性移植物抗宿主病的影响被引量：1: 2005年; 目的:探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响,为rhIL-18用于临床移植免疫提供理论基础。方法:受体鼠(BALB/c)接受9.0Gy剂量的X-射线照射之后,通过其尾静脉注射供体鼠(C57BL/6)的骨髓细胞和脾细胞,并于移植的-2^+2d腹腔注射rhIL-18。移植后观察受体鼠的临床症状和存活状况,同时检测其肝脏、结肠和耳朵的病理变化。结果:移植后aGVHD期内,用rhIL-18治疗的受体鼠GVHD症状积分较未接受rhIL-18治疗的受体鼠低(P<0.05),肝脏和结肠的病理变化轻(P<0.05),短期存活时间延长(P<0.05),但对长期生存率无明显影响。结论:受体鼠早期接受rhIL-18治疗,可在移植后aGVHD期内降低aGVHD的病变程度,为rhIL-18在临床上预防和治疗aGVHD提供了实验依据。; 刘兴田张利宁王玉坤王晓燕高丽芬王群李娜刘军莉; 关键词：白细胞介素18 骨髓移植移植物抗宿主病

低剂量NCPP对Con A诱导肝损伤的保护作用及机理研究: 2006年; 目的:研究低剂量无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)对刀豆蛋白 A(Con A)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机理。方法:BALB/c 小鼠腹腔注射 NCPP(0.01 mg·只)后第7 d 以 Con A(25μg·g^(-1))尾静脉注射诱导小鼠急性肝损伤模型。测定血清转氨酶(ALT/AST)及肝脏内的病理变化。同时设置 PBS 预处理对照组和 Con A 模型对照组,每组8只小鼠。用流式细胞仪检测肝脏内自然杀伤细胞(NK 细胞)的数量变化和 CD4~4T 淋巴细胞的活化情况。结果:与 Con A 模型组相比,NCPP 预处理组小鼠血清转氨酶明显降低[ALT 水平从(328±14)U·L^(-1)下降到(104±41)U·L^(-1),AST 水平从(141±9)U·L^(-1)下降到(98±17)U·L^(-1)],肝脏组织 HE 染色显示肝脏病理损伤明显减轻,同时流式细胞术的分析结果显示:与 Con A 模型组相比,小鼠肝脏 NK 细胞数量降低,且 CD4^+T 淋巴细胞的活化受到了明显抑制。结论:NCPP 对 Con A 诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用。其机理可能与抑制 CD4^+T 淋巴细胞活化和拮抗肝脏内 NK 细胞的回流有关。; 刘成虎高尚先张利宁李娜王群高立芬刘兴田张蘋高飞; 关键词：CD4^+T淋巴细胞 NK细胞血清转氨酶

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李娜

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