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段素琴: 作品数：19 被引量：17H指数：3; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项云南省科技计划项目云南省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学经济管理更多>>

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柯萨奇病毒B组2型SYBR GreenⅠRT-PCR检测方法的建立: 2020年; 目的:建立一种简单快速、灵敏、特异检测柯萨奇病毒B组2型(CVB2)的SYBR Green I逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法:根据CVB2病毒衣壳蛋白1(VP1)的基因保守序列设计带有T7启动子的特异性引物,构建CVB2-T载体的重组质粒,以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线;建立检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法,对该方法特异性、灵敏性及重复性进行评价。结果:该方法在102~109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,最低检测限度为102拷贝/μL,标准曲线中R^2为0.996,扩增效率为102.2%;且该方法对肠道病毒71型(EVA71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)和柯萨奇病毒A组6型(CVA6)均无交叉反应;组间和组内重复性实验中变异系数(CV)均小于1%。结论:本研究建立的检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于CVB2病毒的快速检测和定量分析。; 杨亚平段素琴杨凤梅李艳艳刘权刘雨赵远马绍辉和占龙; 关键词：手足口病逆转录聚合酶链反应柯萨奇病毒感染

新型冠状病毒膜蛋白不具有以Fc受体途径诱导抗体依赖性增强效应的能力: 2022年; 目的:探寻SARS-CoV-2膜蛋白(membrane protein,M protein)引起的免疫特征,尤其是其引发抗体依赖性增强效应(antibody-dependent enhancement,ADE)的可能性。方法:利用原核表达系统制备纯化的SARS-CoV-2全长M蛋白,并经皮下途径3次(第1、14和21天)免疫BALB/c小鼠,获得血清。Western blot鉴定血清特异性,ELISA法和中和试验对血清抗体的效价进行验证。体外培养检测在抗M蛋白血清存在的情况下SARS-CoV-2在树突状细胞、自然杀伤细胞、T和B细胞中的增殖情况。结果:SARS-CoV-2全长M蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的免疫血清能够特异地识别病毒M蛋白,且免疫血清中抗全病毒抗体效价约为1∶400,但该抗体没有中和活病毒的能力。此外,这种抗体不能够辅助病毒感染各种类型具有Fc受体(Fc receptor,FcR)的免疫细胞并在其中增殖。结论:由M蛋白诱导的非中和抗体不能以FcR途径诱导ADE效应。; 常朋兰李琦涵李丹丹段素琴李雪琦张晶晶曾敬富张莹; 关键词：膜蛋白

戊型肝炎病毒ORF3及其截短突变体真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达: 2017年; 目的构建戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV）的开放阅读框3（open reading frame, ORF3）基因及其突变体真核表达载体,并在人肺癌细胞系A549中表达.方法以PUC-HEV为模板,PCR扩增HEV ORF3及其突变体目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1-Flag中,构建重组质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag,并转染A549细胞,利用Western印迹法检测ORF3及其突变体编码蛋白的表达情况.结果经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag构建正确,在转染A549细胞24 h后,在蛋白水平可以检测到ORF3及其突变体编码蛋白.结论成功地构建了HEV ORF3及其突变体真核表达载体,并在A549细胞中成功表达,为后期研究HEV各ORFs组分功能及其致病机制奠定基础.; 郭映秋李饴段素琴王俊斌禹文海杨凤梅赵远马进和占龙; 关键词：戊型肝炎病毒 ORF3 A549肺癌细胞基因表达

人工繁育恒河猴的肺炎链球菌携带状况调查及分析: 2021年; 目的探究人工繁育的恒河猴群体中肺炎链球菌的自然感染状况,为肺炎链球菌感染的临床诊断和治疗提供参考。方法从恒河猴猴群中随机采集20只婴猴、30只成年猴和30只老年猴的鼻拭子和咽拭子样本,采用细菌培养和实时荧光定量PCR方法同时筛查样本中肺炎链球菌的携带情况,并对筛查结果为阳性的婴猴的亲代母猴进行肺炎链球菌筛查。再结合革兰染色法、奥普托欣药敏试验、胆汁溶解试验、菊糖发酵试验和PCR扩增测序对样本进行进一步鉴定。结果恒河猴婴猴携带肺炎链球菌的检出率为20%(4/20),而这4只阳性婴猴的亲代母猴检测结果均为阴性。成年恒河猴和老年恒河猴中肺炎链球菌的检出率均为0%。细菌培养物在形态学上观测显示,该菌为灰白色凸起状,周围草绿色溶血环,呈脐窝状,为典型肺炎链球菌的菌落特征。革兰染色结果显示为阳性,胆汁溶解试验和菊糖发酵试验结果均呈阳性,并且该菌对奥普托欣敏感;以上结果表明本次从婴猴鼻咽拭子分离到的4株菌落均为肺炎链球菌。结论本调查发现在恒河猴中肺炎链球菌自然感染群体主要为婴猴,婴猴携带率约为20%,其鼻、咽部均为该菌寄住场所,且未发现母婴垂直传播情况。; 刘雨李艳艳张伟杨凤梅刘权李咏洁靳玮华段素琴王俊斌陈丽雄徐鸿界赵远和占龙; 关键词：恒河猴肺炎链球菌携带率

野生树鼩与人工饲养树鼩消化道不同部位微生物组成的比较研究被引量：2: 2020年; 目的以树鼩为研究模型,探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3只健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段样本,提取细菌总DNA,采用高通量测序技术对16S rRNA基因的V3-V4高变区测序,分析比较菌群结构及多样性。结果不同肠段Alpha指数多样性分析显示野生组与人工繁育组树鼩在盲肠和胃Shannon指数存在显著差异(P<0.05)。野生组与人工繁育组各肠段微生物组成存在较大差异,门水平上,野生组直肠、结肠、盲肠及胃四个部位中Firmicutes菌门的平均占比显著高于人工繁育组(P<0.05);人工繁育组直肠、结肠、盲肠及回肠内Spirochaetes菌门的平均占比显著高于野生组(P<0.05);野生组直肠内Bacteroidetes菌门的平均占比显著高于人工繁育组(P<0.05);属水平上,野生组明显高于人工繁育组的主要菌属为:回肠、空肠和胃内的Weissella菌属,直肠内的Bacteroides菌属以及回肠段内的Lactococcus菌属;人工繁育组明显高于野生组的主要菌属为:直肠、结肠、盲肠及回肠内的Brachyspira属,盲肠和胃内的Prevotella9菌属,盲肠和空肠内的Streptococcus属以及回肠中的Lactobacillus菌属。不同肠段菌群功能基因预测显示两组共有5个解剖部位17个基因类别之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论野生树鼩与人工繁育树鼩各肠段菌群组成差异较大;各肠段细菌功能差异较大,且与其生理功能、饮食结构有一定关联;在肠道菌群研究中,应充分考虑粪便样品微生物的组成是否能够完全代表肠道微生物的组成。; 李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄段素琴杨亚平刘雨和占龙马进赵远; 关键词：肠道菌群树鼩肠段

人工饲养恒河猴幼猴不同肠段微生物宏基因组学研究: 目的：本研究以恒河猴幼猴为模型,用16SrRNA宏基因组方法探讨十二指肠、盲肠、直肠的菌群组成. 方法：收集4例健康幼猴十二指肠、盲肠、直肠样本,提取细菌总DNA,采用新一代高通量测序技术对16S rRNA基因...; 赵远杨凤梅禹文海王俊斌陈丽雄马进段素琴和占龙; 关键词：肠道微生物动物实验宏基因组学

2018年湖南省登革病毒2型分离株非结构蛋白1基因的鉴定及分析: 2020年; 目的鉴定并分析2018年湖南省登革病毒2型(dengue virus 2,DENV-2)分离株的非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)基因。方法利用试剂盒提取登革热患者血清RNA,RT-PCR法鉴定病毒类型及扩增11株分离株NS1基因,并进行基因测序。应用MEGA 7.0软件分析分离株与DENV-2标准株(KM204118)的NS1基因核苷酸及氨基酸序列,利用最大似然法(1000 Boot strap replicate)构建NS1基因的系统进化树。结果共获得11株分离株的NS1基因,经比对发现,除分离株HNNS201804和HNNS201810外,其余分离株在NS1基因第585位碱基由T变为C(无义突变);HNNS201806的NS1基因第936位碱基由C变为T(无义突变)。11株分离株NS1基因其他突变位点均相同,共68处发生碱基突变,其中9个为有义突变。11株分离株与China-ZJ(2017-MH110594)、China-GZ(2018-MK564485、2015-KX621245、2017-MK564483)、Thailand(2017-LC410191)、Singapore(2016-MF314189)、Philippines(2015-KU517847)有较近的亲缘关系。结论2018年湖南省11株分离株均为DENV-2,可能是浙江或广州输入株,也可能是泰国、新加坡和菲律宾等东南亚国家的输入株。; 冯石军刘雨陈珺段素琴饶清陈俊英管娇琼; 关键词：登革病毒2型 NS1基因系统进化树

野生树鼩与人工饲养树鼩胃肠道不同部位微生物组成的比较研究: 目的以树鼩为研究模型,采用16SrRNA宏基因组方法探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3例健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段(胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)样本,提取细菌总DNA,采用...; 赵远李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄段素琴杨亚平马进和占龙; 关键词：肠道菌群树鼩肠段; 文献传递

一种重组蛋白K-S及其制备方法和应用: 本发明公开了一种重组蛋白K‑S及其制备方法和应用，属于生物技术领域，方案包括在所述S1蛋白的核苷酸序列上，对6个关键位点进行突变，突变位点及碱基分别为：G1251T，T1355G，G1450C，A1501T，A1841G...; 李琦涵范胜涛徐兴丽李丹丹赵恒于丽蒋国润廖芸张莹王丽春张晶晶段素琴高扬曾烽原徐祥雄; 文献传递

人柯萨奇B2病毒感染恒河猴模型的初步研究: 2019年; 目的通过对人柯萨奇B2病毒经口腔感染恒河猴婴猴的感染特征进行初步分析研究,为人柯萨奇B2病毒恒河猴感染模型的建立提供实验方法及技术支持,为后续开展其感染机制、病理生理等研究奠定基础。方法将柯萨奇B2病毒经口腔感染方式感染3~4月龄的恒河猴婴猴,观察记录恒河猴临床症、体温;采集血液检测生理生化指标;血样和疱疹检测病毒;疱疹组织进行病理检测。结果恒河猴感染后2~5 d出现手、足、口疱疹;动物出现精神沉郁、活动及饮食量减少的情况;体温呈现稽留热曲线图;疱疹液和血样中都可检测到柯萨奇B2病毒;血常规检测出现白细胞减少、单核细胞增加、淋巴细胞数量减少、粒细胞数量增加、嗜酸性细胞增加、嗜碱性细胞减少的情况。血液生化检测发现肝功、肾功、心肌酶都发生了不同程度的升高;疱疹组织病理学显示恒河猴疱疹呈鳞状上皮增厚,表面角化过度,局部坏死伴炎细胞浸润,脓肿形成。结论人柯萨奇B2病毒感染婴猴后出现一系列较为特征的手足口疱疹、临床症状、生理生化、病毒血症等情况,表明经口腔感染方式恒河猴婴猴可以成功构建柯萨奇B2病毒感染的动物模型,建立的相关检测方法和技术是可行的,为后续建立开展恒河猴柯萨奇B2病毒感染模型、发病机制研究、药物及疫苗的评价奠定了实验基础。; 段素琴杨亚平杨凤梅李艳艳刘权赵远马绍辉和占龙; 关键词：手足口病

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