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利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系被引量：11: 2015年; CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sg RNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sg RNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。; 卢利莎白杨刘鑫王洪涛高洁杨亦青苏培刘翠翠王钰张磊升熊涛周家喜; 关键词：基因敲除

全内角反射技术与转盘式共聚焦技术在细胞膜表面的成像比较被引量：2: 2016年; 转盘式共聚焦成像是一种高速、高分辨率成像技术,可以在高时间分辨率和空间分辨率的水平观察固定细胞内目标蛋白的分布及活细胞内目标蛋白的动态变化。全内角反射成像是一种观察距离玻片表面某个限定区域内蛋白质的分布和变化的成像技术,常用于观察固定细胞以及活细胞表面的亚细胞结构。该文以中性粒细胞和神经胶质瘤细胞作为观察对象,通过观测固定细胞膜表面蛋白质的分布以及追踪膜标记活细胞的动态变化对两种成像方法进行了比较。结果发现,就目前技术水平而言,二者均可以采集到清晰的细胞边缘,但全内角反射可以拍摄到更清晰的细胞膜表面结构,它在动态拍摄过程中光漂白相对较低,在快速捕捉过程中能够更加全面的捕捉到一个完整的运动过程。; 于文颖耿广峰张辰陈婷梁昊岳程雪莲白杨杨晚竹; 关键词：细胞成像

一种高效的人胚胎干细胞早期造血分化和功能筛选模型的建立: 2013年; 人胚胎干细胞具有分化为造血前体细胞及各种功能血细胞的潜能.但是,目前的分化筛选模型定向诱导分化效率很低,分化程序复杂且较难建立,分化的细胞功能存在缺陷,这些严重影响了对人胚胎干细胞造血分化和功能成熟分子机理的了解.所以,迫切需要建立一种简单且方便进行基因操作的高效的造血分化和功能筛选模型,用于揭示分化过程中动态的分子信号和实时调控机理.本研究中,采用分步法在不依赖血清及基质细胞的条件下,建立了一种高效分化产生造血前体细胞的方法,CD34+CD31+造血前体细胞的比例可达到25%.产生的造血前体细胞可以进一步诱导分化为红系、粒系及粒-巨噬系集落.此外,携带针对T基因干扰shRNA的慢病毒可高效感染人胚胎干细胞,实现高效干扰,调控造血分化效率.本研究建立了一种高效分化产生造血前体细胞的方法,同时表明此模型可以有效与shRNA文库结合,筛选调控人胚胎干细胞造血分化的关键基因,为揭示人胚胎干细胞造血分化机理,以及设计更加完善的分化体系高效获得功能成熟的血细胞用于药物筛选及细胞治疗打下了基础.; 庞素蕾吴清清田莎苏培白杨高洁杨亦青刘鑫朱正茂许元富周家喜; 关键词：人胚胎干细胞造血分化

两种流式细胞术分析软件用于检测小鼠骨髓造血干祖细胞的方法比较被引量：4: 2017年; 目的:探讨流式细胞术中两种不同分析软件在小鼠造血干细胞(HSC)分析中的特点和差异。方法:使用小鼠骨髓细胞悬液作为实验材料,采用BD AriaⅢ流式细胞仪检测小鼠造血干祖细胞(HSPCs),分别应用BD FACSDiva Software v6.1.3和FlowJo 7.6.1软件对检测数据进行分析,并对比分析其数据结果。结果:FACSDiva与FlowJo软件在数据导入、数据显示、圈门、补偿调节、数据导出和特色分析等存在细微差异,各项检测指标均可实现多色流式细胞分析功能。结论:FACSDiva和FlowJo软件分析同一样本所得结果具有较高的一致性。; 付伟超梁昊岳王楠于文颖程雪莲任怡然杨晚竹陈婷白杨董芳; 关键词：流式细胞术造血干祖细胞

CRISPR/Cas9-sgRNA全基因组文库筛选人单核细胞白血病功能性促癌/抑癌基因体系的建立与优化被引量：3: 2016年; CRISPR/Cas9-sg RNA(single guide RNA)全基因组文库筛选技术是在哺乳动物中进行系统基因组分析的有力工具.本文通过在人急性单核白血病细胞系THP1上优化CRISPR/Cas9-sg RNA人类全基因组慢病毒文库感染体系,构建裸鼠皮下移植肿瘤模型,并通过优化测序建库方法,对肿瘤组织进行二代测序以及利用生物信息学分析获得筛选结果.裸鼠肿瘤模型表明,感染sg RNA文库后的THP1细胞成瘤能力下降,推测可能与某些促癌基因的敲除有关;通过对二代测序数据进行生物信息学分析得到了一些候选基因.实验结果表明,在人单核细胞白血病细胞系上进行CRISPR/Cas9-sg RNA全基因组文库筛选是可行的,这项工作为在其他白血病细胞系或原代细胞上的筛选应用奠定了一定基础.; 陈晨郝莎白杨张健萍张孝兵程涛; 关键词：基因筛选

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白杨