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HLA-DRα*0101、DRβ1*04051和DRβ1*07011的分子克隆、测序及空间结构模建被引量：1: 2001年; 目的 :为探索HLA(humanleukocyteantigens,HLA)不同分子的空间结构差异与功能之间的关系以及结构差异能否对预测造血干细胞移植GVHD(graft versus hostdisease ,GVHD)的发生奠定基础。方法 :提取人外周血总RNA ,RT PCR扩增HLA DR等位基因全序 ,连接、转化大肠杆菌后并测序。将第二外显子氨基酸序列输入微机 ,通过INTER NET传送至SWISS MODELLING蛋白质空间结构模建服务器进行结构模建。结果 :本文反转录了 2例健康无血缘关系个体的HLA DR位点基因全序 ,测序结果与HLA DRα 0 10 1、DRβ1 0 40 5 1和DRβ1 0 70 11的公布序列完全一致。对后两者的蛋白质空间结构模建发现它们在空间结构上存在显著差异。结论 :对HLA基因位点进行全长测序可以明确判断基因型别 ;空间结构模建可以直观地辨别HLA不同分子在空间结构上的差异。; 孙玉英孔繁华奚永志屠敏刘楠; 关键词：HLA 造血干细胞移植

重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应被引量：4: 2001年; 目的　构建重组人白细胞介素 6 绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL 6D2 4 PE40 ,以选择性杀伤高表达IL 6受体 (IL 6R)的肿瘤细胞和白血病细胞。方法　采用重叠延伸的基因融合技术将N 末端缺失 2 4个氨基酸的重组人白细胞介素 6 (IL 6D2 4)cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合 ,构建IL 6D2 4 PE40融合基因。利用HB10 1/pBV2 2 0表达系统 ,实现了IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 ,经MonoQ柱进行层析纯化 ,采用MTS法检测细胞毒活性。结果　IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到 40 %～ 6 0 %。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度 >95 %的融合蛋白。Westernblot证明 ,纯化的融合蛋白与IL 6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实 ,IL 6D2 4 PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL 6R的U937细胞 ,ID50 约为 2 5 0ng/ml,而对不表达IL 6R的CEM细胞无杀伤作用。结论　IL 6D2 4 PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL 6R的靶细胞 ,有希望成为导向治疗高表达IL 6 /IL; 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏刘楠; 关键词：基因克隆生物学效应

HLA-DRB1高分辨基因分型在造血干细胞移植中的意义探讨: 2000年; 目的　探讨造血干细胞移植中进行供受体HLA DRB1高分辨基因分型的重要作用 ,并对HLA DRB1等位基因频率在中国人群中的分布进行分析。方法　采用美国莱姆达公司提供的微量SSPTMHLA DRB1PCR SSP低分辨及高分辨分型试剂盒对 10 1例造血干细胞移植供受体进行高分辨基因分型 ,其中供受体 37对 ,无关个体 5 0例。结果　在 37对供受体分型中 ,有 2对为低分辨HLA DRB1位点相合 ,而高分辨结果为不合 ,其余 35例低分辨及高分辨结果一致。对 5 0例无血源关系供体的HLA DRB1位点高分辨结果进行了等位基因频率分析 ,发现DRB1 0 90 12、DRB1 12 0 2 1/0 2 2、DRB1 0 70 1、DRB1 0 30 11、DRB1 15 0 11/0 12出现频率比较高 ,其频率分别为 36 %、2 2 %、2 0 %、12 %、12 %。结论　HLA DRB1高分辨基因分型分辨率高 ,可明确判定基因型别 ,对于同胞间或无关供; 屠敏孔繁华奚永志孙玉英刘楠郭斯启; 关键词：造血干细胞移植基因分型

HLA-I类PCR-SSP基因分型在异基因造血干细胞移植中的应用被引量：11: 2001年; 目的　提高异基因造血干细胞移植供、受者HLA I类配型的精确度 ,有效防止移植物抗宿主病 (GVHD)的发生。方法　采用准确、简便的DNA、RNA提取方法和HLA I类PCR SSP基因分型方法。建立HLA A33、A6 8、B40、B13PCR SSP分型方法以及HLA基因序列测序分析。结果　对 30 0例中血清学难以判断结果的 30例临床标本进行基因水平的研究发现 ,DNA及RNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA I类PCR SSP分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性 ;重复率达 10 0 %。同时 ,HLA A33、A6 8、B40、B13结果与HLA I类PCR SSP分型结果一致。HLA基因测序分析进一步肯定了HLA I类PCR SSP分型的特异性。HLA I类PCR SSP不受某些血清学影响因素的干扰。整个实验过程仅耗时 2 .5h。结论　HLA I类PCR SSP基因分型方法准确、特异、重复性好 ,可作为临床骨髓移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法。; 孙玉英孔繁华奚永志刘楠屠敏金荔陈兴国; 关键词：造血干细胞移植移植物抗宿主病移植免疫学

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屠敏