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胡永亮
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
供职机构:
解放军第309医院
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国家自然科学基金
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相关领域:
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合作作者
马恬
解放军第309医院
焦大凯
航空工业中心医院
贾赤宇
解放军第309医院
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刘真
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RhoA/Rho激酶信号通路在TGF—β1诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用
被引量:4
2011年
目的 观察TGF—β1对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到RhoA/Rho激酶信号通路的影响,以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法原代培养人皮肤成纤维细胞,将第4代细胞用TGF—β1(10ng/ml)刺激后,分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度,Western—blot检测a—SMA的表达水平;并用相同的方法检测不同浓度TGF—β1(0、2、10、50ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后,a-平滑肌肌动蛋白(d—smoothmuscleactin,a—SMA)的表达水平。用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后,再用TGF—β1刺激,作为实验组,将未作处理的正常细胞作为空白对照组,Y-27632(10μmol/L)组作为阴性对照组,只用TGF-β(10ng/ml)刺激组作为阳性对照组,分别检测a-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白表达量进行统计学分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果10ng/mlTGF-β按不同作用时间刺激人皮肤成纤维细胞后,a—SMA的表达量分别为:0h为1.0,3h为1.9±0.2、6h为2.1±0.1,24h为3.1±0.1。24h较其他3个时间点a-SMA表达量明显上升(n=4,P〈0.05)。不同浓度TGF—β1刺激人皮肤成纤维细胞后,a—SMA的表达量分别为:0ng/ml为1.0,2ng/ml为1.4±0.2,10ng/ml为3.2±0.1,50ng/ml为3.1±0.2。10ng/ml表达量明显高于0ng/ml和2ng/ml(n=4,P〈0.05),较50ng/ml差异无统计学意义(n=4,P〉0.05)。用Y-27632(10μmol/L)处理后,再用TGF—β1刺激,细胞的表型转化明显受到抑制,实验组a—SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组(2.9±0.1)明显降低(n=5,P〈0.05),与空白对照组(1.0)和阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均无统计学意义(n=5,P〉0.05)。结论RhoA/Rho激酶信号通路参与了TGF—B。诱导的人皮肤成纤维细胞表型转
胡永亮
刘真
焦大凯
马恬
王常勇
贾赤宇
关键词:
成纤维细胞
转化生长因子Β1
A-平滑肌肌动蛋白
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