周雨田
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 反义内皮素转换酶核酸纳米粒对变应性气道炎症的作用
- 2008年
- 目的观察气管给予12-烷基化壳聚糖纳米粒（12-ACSs）包裹的反义内皮素转换酶（ECE）核酸表达质粒对小鼠变应性气道炎症的影响。方法将40只健康雌性Balb／c小鼠按完全随机设计原则分为4组，每组10只，分为健康对照（N）组、OVA致敏激发并给予包裹反义ECE核酸的12-ACSs（NM）组、OVA致敏激发气道炎症模型（As）组及OVA致敏激发并给予裸反义ECE核酸（DNA）组。NM组、As组、DNA组在致敏后于首次激发前24h分别通过气管灌注包裹反义ECE核酸的12-ACSs100μl、生理盐水100μl和反义ECE核酸5μg加生理盐水（总量100μl），N组用等体积生理盐水处理。末次激发后24h收集BALF，计算BALF中细胞总数、分类计数。HE染色观察各组小鼠肺组织的病理变化。ELISA法检测肺组织匀浆、脾细胞培养上清液白细胞介素（IL）-4、5、10、13、干扰素-γ（IFN-γ）和内皮素-1（ET—1）水平。流式细胞仪分别检测分泌IL-4、IFN-γ和IL—10脾细胞比例。对各组数据进行正态检验和单因素方差齐性检验，采用LSD法进行两两比较。结果NM组小鼠BALF中细胞总数为（5．4±0．6）×10^5／ml、嗜酸性粒细胞为（1．8±0．4）×10^5／ml，均明显低于As组[分别为（8．5±O．9）×10^5／ml、（3．8±0．6）××10^5／m1]和DNA组[分别为（8．3±1．1）×10^5／ml、（3．8±0．5）×10^5／m1]，均P〈0．01；NM组小鼠肺组织的病理损害明显轻于As组和DNA组。肺匀浆N组ET-1水平为（11．7±1．7）ng／L，明显低于NM组的（18．5±1．4）ng／L、As组的（28．9±2．3）ng／L和DNA组的（27．1±1．6）ng／L，均P〈0．01），而NM组ET-1水平则明显低于As组和DNA组（均P〈0．01），As组和DNA组差异无统计学意义。N组IL-5水平均明显低于NM组、As组和DNA组（均P〈0．01），而NM组IL-5水平则明显低于As组和DNA组（均P〈0．05），As组和DNA组差异无统计学意义。IL-4、IL-13结果与IL
- 周雨田徐军
- 关键词：哮喘壳聚糖基因疗法
- 12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒在哮喘基因治疗中的特征被引量：3
- 2007年
- 目的:气道给予12-烷基化壳聚糖纳米粒包裹的反义内皮素转换酶核酸表达质粒,观察对卵清蛋白致敏的小鼠变应性气道炎症的影响,并与裸DNA组小鼠作比较。方法:实验于2004-03/2006-02在广州医学院第一附属医院海印分院15楼实验室完成。①40只Balb/c小鼠采用随机数字法分为4组,每组10只。②12-烷基化壳聚糖纳米粒的制备:将12-烷基化壳聚糖纳米絮状物溶于0.05mol/L醋酸钠/0.05mol/L醋酸溶液中,浓度0.02wt%,将反义内皮素转换酶核酸溶于25mmol/L的Na2SO4溶液中,浓度0.01wt%,按烷基化壳聚糖与反义内皮素转换酶核酸按不同质量比制备包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒。③凝胶阻滞实验:为检测pH值对DNA结合力的影响,在pH=3,4,5,6,7,8时,反义内皮素转换酶核酸与12-烷基化壳聚糖纳米粒按质量比为1∶2,4,8的比例混合;为检测不同质量比时12-烷基化壳聚糖纳米粒对DNA结合力的影响,在pH=6时,反义内皮素转换酶核酸与12-烷基化壳聚糖纳米粒按质量比为1∶0.5,1,2,4,8,16,32的比例混合;反义内皮素转换酶核酸的浓度恒定为1g/100L,10g/L琼脂糖凝胶电泳60V电泳1h。④包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒治疗组(纳米粒治疗组)、卵清蛋白致敏激发组、卵清蛋白致敏激发并给予裸DNA组(裸DNA组)于第0天与第14天每只小鼠分别腹腔注射卵清蛋白致敏液0.2mL,生理盐水对照组注射等体积的生理盐水;前3组于第24,25,26天,以10g/L卵清蛋白溶液8mL雾化吸入。生理盐水对照组用等体积生理盐水雾化作为对照。纳米粒治疗组、卵清蛋白致敏激发组和裸DNA组于激发前24h分别给予气道灌注包裹反义内皮素转换酶核酸的12-烷基化壳聚糖纳米粒75μL、生理盐水75μL和反义内皮素转换酶核酸5μg加生理盐水(总量75μL),生理盐水对照组灌注生理盐水75μL。⑤末次激发后24h进行支气管肺泡灌洗,计算�
- 周雨田徐军
- 关键词：哮喘壳聚糖基因疗法
- 12-烷基化壳聚糖包裹反义内皮素转换酶核酸表达质粒在变应性气道炎症基因治疗中的作用
- 气道给予12-烷基化壳聚糖纳米粒(12-ACSs)包裹的反义内皮素转换酶(ECE)核酸表达质粒, 观察对OVA致敏的小鼠变应性气道炎症的影响。40只Balb／c小鼠随机分为正常对照(N)组、OVA 致敏激发并给予包裹反义...
- 周雨田徐军
- 文献传递
- 12-烷基化壳聚糖纳米粒-反义内皮素转换酶核酸表达质粒的制备及其性质研究被引量：5
- 2007年
- 目的:气道给予12-烷基化壳聚糖纳米粒(12-ACSs)包裹的反义内皮素转换酶(ECE)核酸表达质粒,观察对OVA致敏的小鼠变应性气道炎症的影响。方法:通过透射电镜观察12-ACSs/反义ECE质粒复合体纳米粒的形成、形态及大小;应用凝胶阻滞、结合平衡、DNA沉淀和DNA酶消化实验等检测12-ACSs对反义ECE核酸表达质粒的结合保护作用;通过MTT实验检测12-ACSs对细胞的毒性;通过离体培养细胞及活体动物转染实验观察12-ACSs能否携带反义ECE核酸表达质粒成功转染。结果:电镜观察显示纳米粒粒径在100～150nm之间。12-ACSs与反义ECE核酸表达质粒在质量比为1:1时,全部反义ECE质粒被结合。应用DNaseI消化后可见,12-ACSs可保护核酸免受破坏。MTT检测结果显示12-ACSs对16HBE细胞在低浓度下几乎没有毒性。12-ACSs包裹的反义ECE核酸表达质粒的纳米粒能成功转染离体培养的气道上皮细胞及活体动物。结论:12-ACSs能够成功包裹反义ECE质粒并且成功转染16HBE及小鼠,其有可能作为一种基因治疗的载体选择之一。
- 周雨田徐军
- 关键词：哮喘壳聚糖纳米粒内皮素转换酶基因治疗
- 反义内皮素转换酶核酸表达质粒纳米粒所致内皮素的减少对哮喘小鼠气道高反应性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨12-烷基化壳聚糖纳米粒(12-ACSs)包裹的反义内皮素转换酶(ECE)核酸表达质粒对哮喘模型小鼠气道高反应性的影响。方法将40只小鼠按完全随机设计原则分为4组,每组10只。AS组予OVA致敏激发气道炎症并只给予生理盐水干预组;N组仅维予生理盐水致敏,激发并治疗;NM组于OVA致敏激发并给予包裹反义ECE核酸的12-ACSs;DNA组以OVA致敏激发并给予裸反义ECE核酸。3组在致敏后于首次激发前24小时分别通过气道灌注包裹反义ECE核酸的12-ACSs100μl、0.9%生理盐水100μl和反义ECE核酸5μg加0.9%生理盐水(总量100μl),N组用等体积0.9%生理盐水处理。末次激发后检测进行支气管肺泡灌洗,计算支气管肺泡灌洗液中细胞总数、分类计数,肺组织病理切片,观察病理变化。采用整体体积描记法检测小鼠气道反应性,ELISA法检测脾细胞培养上清液白细胞介素(IL)-4、和内皮素1(ET-1)水平。结果 NM组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、分类计数明显低于As组和DNA组(均P<0.01),肺组织的病理损害明显减轻。As、NM、DNA组较N组小鼠气道气道反应性明显增高,而NM组气道阻力较As及DNA组明显降低。脾细胞培养上清液N组ET与IL-4水平均明显低于其余3组,而NM组ET与IL-4水平则明显低于As组和DNA组(均P<0.001)。结论气道内给予包裹反义ECE核酸表达质粒的12-ACSs纳米粒治疗,可以减少ET的合成,从而抑制气道高反应性。
- 周雨田徐军
- 关键词：哮喘内皮素气道高反应性纳米粒
