王新旺
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南华大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学一般工业技术更多>>
- 猪、兔、鼠肾生物支架制备及体外HEK细胞共培养探究
- 目的：肾脏移植是终末期肾病的最佳替代治疗手段，受者接受肾移植后需长期服用免疫抑制剂。移植入无排异反应的人工合成组织工程肾脏可解除长期服药痛苦。猪肾因与人肾生理性能相似而倍受期待，但异种细胞共培养的物种差异还尚未见报道。本...
- 王新旺
- 关键词：增殖活性
- 文献传递
- 猪兔鼠肾生物支架制备及体外细胞共培养探究被引量：2
- 2018年
- 目的灌注制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾去细胞生物支架,探究三种肾支架对共培养种子细胞HEK的影响。方法取健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将取出的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1%Triton X-100和1%SDS溶液完成去细胞化。两组肾分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量作灰度分析。结果家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性,Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组弹性模量与正常组肾弹性模量差异无显著性,支架组PCNA/DAPI值均高于空白对照组,而三种支架组之间PCNA/DAPI值无显著性差异。结论本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备三者肾去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。
- 王新旺周乐斌梅劲梅劲张德明刘丹陈胜华
- 关键词：去细胞生物支架共培养
- 大鼠单叶肝去细胞生物支架的制备与鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的通过灌注法制备大鼠单叶肝去细胞生物支架,并对其进行鉴定。方法健康成年SD大鼠20只,随机分为去细胞组和正常对照组,每组10只。去细胞组经门静脉灌胃针插管,恒温37℃依次灌注肝素化PBS溶液,1%Triton X-100(p H 7.5~8.0)及PBS溶液。HE、Masson染色及扫描电子显微镜观察组织学及超微结构改变;免疫荧光结合4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)观察2组胶原蛋白Ⅳ和Ⅰ、层黏连蛋白和纤维连接蛋白观察细胞外基质的主要成分;DNA定性和定量分析组织中残留DNA浓度和片段长度;聚甲基丙烯酸甲酯铸型观察肝脏内血管分布情况。结果 Triton X-100灌注4h左右即可制备单叶肝脏去细胞生物支架。在灌注过程中,肝内细胞和细胞碎片逐渐被清洗,最终变成半透明状。HE、Masson、免疫荧光染色及扫描电子显微镜显示,去细胞组肝生物支架较完整地保留了细胞外支架的成分,未见明显细胞及细胞核成分残留;去细胞组支架DNA残留量较正常对照组下降了97.32%,琼脂糖凝胶电泳未见明显的DNA条带。血管铸型标本显示,去细胞组血管分布与正常对照组相仿,其分支完整、清晰。结论运用Triton X-100灌注法所制备的大鼠单叶肝生物支架去细胞彻底,较完整地保留细胞外基质和血管网络结构,是一种简单易行且较为理想的制备实验用单叶肝生物支架的方法。
- 秦雨萌周涛张璐刘裕王新旺王志斌梅劲陈胜华
- 关键词：去细胞细胞外基质免疫荧光
