陈思思
- 作品数：7 被引量：47H指数：5
- 供职机构：十堰市人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Livin和Survivin基因短发夹RNA真核表达载体的构建及其联合转染对肝癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2018年
- 目的设计并构建能够有效干扰Livin和Survivin基因的表达,且能在胞内稳定转录的表达载体;研究Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染对肝癌细胞增殖活性及凋亡的影响。方法根据设计siRNA的原理,分别从Livin、Survivin基因序列中选取两段siRNA靶序列模板,以其为基础进行shRNA真核表达载体Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin的构建。将传代培养的肝癌Hep G2细胞株分为五组:设阴性对照组(不转染)、空白质粒组(单独转染Pgenesil-1-NC)、Survivin组(单独转染Pgenesil-1-Survivin)、Livin组(单独转染Pgenesil-1-Livin)和共转染组(联合转染Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin),对各组细胞进行单独或联合转染。为检测转染2 d后Livin和Survivin蛋白表达的情况、转染后三个不同时间点(48 h、60 h、72 h)的细胞增殖活性变化及转染后48 h的细胞凋亡率,分别采用了蛋白质印迹法、MTT法及TUNEL法。结果两种表达载体的测序结果与预期相同。与阴性对照组及空白质粒组相比,转染后2 d,Livin组、Survivin组和共转染组的蛋白表达均明显下降(P<0.05),而与Livin组和Survivin组相比,共转染组蛋白表达的下降更为显著(P<0.05);各组细胞在3个检测时间均表现出增殖活性的下降,且与Livin组和Survivin组相比,共转染组在三个检测时间的细胞生长抑制率(IR)值分别为28.541±0.842、21.644±0.129、15.532±1.12,明显高于前者(P<0.05);转染后48 h,共转染组凋亡率为53.956%±4.332%,明显大于Livin组和Survivin组(P<0.05)。结论成功设计并构建体内可稳定转录且能有效干扰目的基因表达的质粒载体。对肝癌细胞进行Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染,可更大程度下调相应基因的表达,降低Livin蛋白和Survivin蛋白的胞内含量,可更为有效地阻碍癌细胞的异常增殖,促进癌细胞的程序性凋亡。
- 刘勇王斌陈思思
- 关键词：肝癌细胞LIVIN短发夹RNA联合转染
- TLR3基因缺陷的肝纤维化小鼠血生化指标、肝组织纤维化标志物及炎性因子变化被引量：5
- 2018年
- 目的分析Toll样受体3(TLR3)基因缺陷的肝纤维化小鼠血生化指标、肝组织纤维化标志物及炎性因子变化。方法将18只野生型雄性小鼠随机分为空白造模组和空白对照组,两组各9只;将18只TLR3基因缺陷型雄性小鼠随机分为TLR3造模组和TLR3对照组,两组各9只。空白造模组和TLR3造模组均注射四氯化碳,而空白对照组与TLR3对照组均注射玉米油。造模2个月后,采集血液标本,通过全自动生化分析仪对血清白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平进行测定。比较各组小鼠肝组织纤维化标志物(Ⅰ型胶原)表达水平和肝组织炎性因子如白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达水平。结果空白造模组ALB水平较空白对照组明显降低,TBIL、AST及ALT等血生化指标的水平较空白对照组均显著升高(P<0.01);TLR3造模组ALB水平较空白对照组明显降低,TBIL、AST及ALT等血生化指标的水平较TLR3对照组均显著升高(P<0.01),但与空白造模组比较,均无显著差异(P>0.05)。空白造模组肝组织纤维化标志物(Ⅰ型胶原)表达水平较空白对照组显著升高(P<0.01);TLR3造模组Ⅰ型胶原表达水平较空白造模组、TLR3对照组均显著升高(P<0.01)。空白造模组IL-6、TNF-α及MCP-1等肝组织炎性因子表达水平较空白对照组显著升高(P<0.05);TLR3造模组炎性因子水平较空白造模组、TLR3对照组均显著升高(P<0.05)。结论 TLR3基因缺陷的肝纤维化小鼠经四氯化碳诱导后,Ⅰ型胶原等肝纤维化标志物的水平明显升高,并且IL-6、TNF-α及MCP-1等肝组织炎性因子表达亦明显上升,提示TLR3可能是一种保护性基因,在肝纤维化疾病发生及发展中起到阻滞肝组织炎性因子等重要作用。
- 刘勇王斌陈思思
- 关键词：小鼠肝纤维化TOLL样受体3基因缺陷血生化指标
- siRNA沉默胰腺癌BXPC-3细胞中Her-2/neu基因对COX-2表达水平及细胞增殖、凋亡、侵袭力的影响被引量：1
- 2018年
- 目的分析胰腺癌BXPC-3细胞中原癌基因人表皮生长因子受体-2(Her-2/neu)基因siRNA沉默对环氧合酶-2(COX-2)表达水平及其对细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法通过Western blot法与实时荧光定量PCR法对正常胰腺细胞株和胰腺癌BXPC-3细胞中的COX-2、Her-2/neu蛋白及其mRNA表达进行检测。建立Her-2/neu基因siRNA慢病毒表达载体并对BXPC-3细胞进行转染,其中转染Her-2/neu siRNA慢病毒载体为观察组,转染NC-GFP-LV为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组。分别采用CCK-8法、流式细胞分析仪和细胞实验技术(Transwell实验)分析Her-2/neu基因siRNA沉默对细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。结果 COX-2、Her-2/neu蛋白及其mRNA在胰腺癌BXPC-3细胞中的表达水平明显高于正常胰腺HPDE6C7细胞的表达(P<0.01)。观察组COX-2、Her-2/neu蛋白及其mRNA表达水平明显下调,较阴性对照组与空白对照组表达水平均明显降低(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组表达水平的比较,并无显著差异(P>0.05)。Her-2/neu基因siRNA沉默可明显减弱细胞增殖和侵袭力,增加细胞凋亡率。结论 COX-2、Her-2/neu蛋白及其mRNA在胰腺癌BXPC-3细胞中均呈现高表达,且Her-2/neu基因siRNA沉默可明显阻滞细胞增殖及侵袭,导致细胞凋亡。
- 刘勇王斌陈思思
- 关键词：胰腺癌SIRNA沉默
- TOP2a、Nek2及RRM1在胃癌癌组织中表达及临床意义被引量：11
- 2019年
- 目的探讨拓扑异构酶2a(TOP2a)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(Nek2)、核苷酸还原酶亚基1(RRM1)在胃癌癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性研究,通过免疫组化法测定60例胃癌癌组织(观察组)、30例正常组织(对照组) Top2A、NEK2、RRM1表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组Top2A、NEK2、RRM1阳性率分别为66. 67%、65. 00%、83. 33%,均显著高于对照组的10. 00%、13. 33%、16. 67%,差异有统计学意义(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与患者TNM分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移显著相关(P <0. 05),NEK2表达与患者分化程度、淋巴结转移显著相关(P <0. 05),RRM1表达与患者分化程度、浸润深度显著相关(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与NEK2、RRM1均呈正相关(P <0. 05)。结论胃癌癌组织中TOP2a、Nek2及RRM1高表达,且三者正相关,与肿瘤分化程度、浸润深度或淋巴结转移密切相关,检测TOP2a、Nek2及RRM1有利于肿瘤发生、进展评估,指导临床治疗。
- 刘勇王斌陈思思胡培
- 关键词：胃癌
- 糖尿病胃肠植物神经病变与胃动力学的相关性研究被引量：6
- 2016年
- 目的:探讨糖尿病胃肠植物神经病变与胃动力学的相关性,从而为该疾病的早期防治提供科学理论依据。方法:以我院于2013年12月~2014年12月期间收治的100例2型糖尿病患者作为研究对象,通过半流质核素胃排空试验对其胃动力学特征进行研究,同时运用Ewing方法定量分析患者心血管植物神经功能。结果:胃动力学异常患者有57例(57.0%),且其胃动力学特征与胃动力学正常患者差异明显;与胃动力学正常患者比较,异常患者心血管植物神经功能相关评价指标均出现异常,且相关性较强指标为卧立压差与乏氏指数。结论:胃动力学异常糖尿病患者,发生胃肠植物神经病变概率明显增加。因此,给予糖尿病患者及时进行胃排空试验,对于糖尿病胃肠植物神经病变的防治具有重要临床意义。
- 李晓雯廖勇敢陈思思马娟
- 关键词：糖尿病胃动力学
- 2型糖尿病伴下肢血管病变患者血清人血管生成素样蛋白4、脂蛋白相关磷脂酶A2、脂联素与其病情程度的关系及相关影响因素被引量：10
- 2021年
- 探讨2型糖尿病(T2DM)伴下肢血管病变(LVD)患者血清人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、脂联素(APN)与其病情程度的关系及相关影响因素。方法选取T2DM伴LVD患者96例,根据LVD严重程度分为重度组(48例)、中度组(24例)及轻度组(24例)。收集3组患者的一般资料及实验室检查结果[低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清空腹胰岛素(FINS)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白(HbA1c)及血清ANGPTL4、LP-PLA2、APN]并比较。采用logistic回归分析对T2DM患者LVD的影响因素进行分析。结果随着LVD严重程度增加,轻、中、重度组患者年龄、BMI、HbA1c、FINS、HOMA-IR、血清ANGPTL4、LP-PLA2水平依次增加,而血清APN水平依次降低(P<0.05)。单因素分析结果显示,不同年龄、BMI、HbA1c、HOMA-IR、血清ANGPTL4、LP-PLA2、APN水平患者LVD发生率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,APN水平升高为T2DM患者发生LVD的保护因素,而高龄及HOMA-IR、ANGPTL4、APN、LP-PLA2水平升高为T2DM患者发生LVD的危险因素(P<0.05)。结论年龄、HOMA-IR、ANGPTL4、APN、LP-PLA2水平与T2DM患者LVD显著相关,可为LVD的预防及预后评估提供参考价值。
- 邵欣李艳丽陈思思孙倩舒丁洪成
- 关键词：2型糖尿病下肢血管病变脂联素脂蛋白相关磷脂酶
