周华蓉
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用
- 2007年
- 目的研究转染FADD缺失突变体（FADDdel）和WeelHu／GFP的胰岛β细胞株（NIT细胞）抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu／GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养，利用^51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果转染weelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化（P〉0．05）。转染pCMV-WeelHu／GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞（P〈0．01），表达weelHu或WeelHu／GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义，转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用（P〈0．05），但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤，且对胰岛素的分泌及细胞增殖无明显影响。
- 廖雯君周新荣周华蓉雷萍王敏刘静文雪黄鹤朱慧芬沈关心
- 关键词：绿色荧光蛋白质类FADD
- 重组膜联蛋白Ⅱ表达载体构建及其促纤溶特性研究
- 2002年
- 膜联蛋白Ⅱ (annexinⅡ )是纤溶酶原和组织型纤溶原激活物的共同受体。本研究旨在探讨annexinⅡ引起急性白血病及其它肿瘤患者原发性纤溶亢进的分子病理机制 ,阐明annexinⅡ促纤溶活性 ,为探讨annexinⅡ在凝血障碍中的作用提供理想的载体模型。用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增annexinⅡ基因片段 ,经纯化及连接 ,用脂质体转染入HL 60细胞中表达 ;用多光子激发的共聚焦显微镜观察其表达产物的胞内分布及结构特性 ;用流式细胞术及Western印迹对转染的细胞表达进行定量及定性分析 ,并揭示其对纤溶酶活性的影响。结果显示 :成功地构建了 pZeoSV2 (+) /ANNⅡ真核表达质粒 ,经转染HL 60细胞后 ,可表达annexinⅡ活性蛋白 ,荧光检测显示其表达蛋白分布在转染细胞的膜表面 ;FCM检测annexinⅡ在转染后 48小时呈高表达 ;annexinⅡ可显著增加纤溶酶的活性 ,且瞬时表达及稳定表达具有相同的结果。annexinⅡ反义寡核苷酸与单抗均可显著抑制annexinⅡ的促纤溶活性 (P <0 .0 1 )。结论 :annexinⅡ在纤维蛋白溶解中具有重要作用 ,用本研究构建的annexinⅡ重组载体可为今后的相关研究提供实验基础 ,并为防治出血及血栓性疾病研究有可能提供新的思路和开辟新的途径。
- 张晓晖周华蓉胡豫魏文宁杨林花沈关心乔振华宋善俊
- 关键词：质粒构建纤维蛋白溶解分子病理机制凝血障碍
- 大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因延长异种胰岛细胞移植后存活时间
- 2007年
- 目的 探讨大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因对异种胰岛细胞移植后存活时间的影响。方法 以Wistar大鼠为供者，Balb／c糖尿病小鼠为受者，进行异种胰岛细胞移植。实验分为2组，每组20只。实验组：将转染Wee1Hu基因的1×10^6个供者胰岛细胞悬于0．5ml无菌生理盐水中，注射至受者的腹腔；空白对照组：将1×10^6个空载体胰岛细胞用与实验组相同的方法注射至受者腹腔。实验组和空白对照组的部分受者在移植前1周腹腔注射降植烷0．5ml，并于胰岛细胞移植后开始口服环孢素A30mg／kg，直至实验结束。监测2组胰岛细胞移植后的胰岛素释放功能及存活时间。结果 胰岛细胞移植后，空白对照组的受者均维持高血糖，且体重持续下降，平均生存时间为（18±2．5）d；实验组的受者血糖在2d内均降至正常，且体重增加，生存时间延长（38±3．5）d；两组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。空白对照组维持正常血糖时间为（8±2．3）d，而实验组为（10±2．5）d。实验组中采用免疫抑制剂治疗的受者，长期维持正常血糖，平均维持时间超过30d，与空白对照组中采用免疫抑制剂治疗的受者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因可延长异种胰岛细胞移植后的存活时间，与免疫抑制剂协同作用时效果更佳。
- 周新荣周华蓉朱慧芬雷萍邵静芳张悦杨敬张木勋沈关心
- 关键词：胰岛移植转染基因
- FADD缺失突变重组体转染的人β胰岛细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：2
- 2001年
- 目的 建立Fas相关死亡域 (FADD)缺失突变体的表达细胞系 ,阻断Fas死亡信号传导 ,以便今后更深入的探讨通过基因水平修饰靶细胞 ,改变靶细胞的反应状态 ,对移植免疫和自身免疫性疾病的可能的影响。方法 用RT PCR从感染患者外周血淋巴细胞中获得缺失FADD死亡域目的基因片段 (FADDdel) ,利用双酶切将FADDdel定向导入真核表达载体pUC pIC ;用电穿孔法将重组子导入人 β胰岛细胞株 (NIT)中 ,采用FACS法检测sFasL所引起的转染前后NIT凋亡情况。同时在In ternet中通过计算机数字化分子模型技术 ,成功模建FADDdel的 3D结构并与FADD的立体结构进行比较与分析。结果 RT PCR法得到约 5 0 0bp的目的基因片段 ,转化子用BglⅡ ,XbaⅠ酶切后得到 3个特异性片段 ,经酶切和测序鉴定为FADD缺失突变的重组体 (pFADDdel)。将pFADDdel导入NIT后 ,筛选出高表达细胞系F15 ,在IFN γ和TNF α存在时F15仍能有效拮抗sFasL诱导的凋亡 ;并对FADD和FADDdel功能结合域和结合位点分析 ,阐明了FADDdel蛋白质分子在阻断细胞凋亡胞内信号传导通路的分子机制。结论 成功建立了FADDdel稳定表达的人胰岛细胞株 ;pFADDdel能有效抑制Fas和TNFR1介导的胞内凋亡信号通路 ;
- 周华蓉李鸣张悦周新荣沈关心
- 关键词：移植免疫自身免疫性疾病
