张大军
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
- 供职机构：同济医科大学实验医学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双Tac启动子的构建及其对人白细胞介素2在大肠杆菌中表达的影响被引量：3
- 1993年
- 采用基因工程技术,在表达质粒 PTLIL-2中于人白细胞介素 2(interleukin 2,IL-2)cD-NA 片段前插入了来自质粒PDR540的含Tac 启动子的片段,并适当调整SD 序列与ATG 密码之间的距离,构建成含双Tac 启动子和双SD 序列的质粒 PTLIL-2DT。结果该重组质粒的IL-2 基因在大肠杆菌中表达效率提高了4倍。本文对重组 IL-2抽提和生物活性恢复的处理方法也作了探讨。
- 张大军冯博皇甫永穆
- 关键词：操纵子白细胞介素2基因表达
- 分枝杆菌穿梭表达质粒的构建及外源基因在分枝杆菌中的稳定表达被引量：1
- 1995年
- 卡介苗（ＢＣＧ）是全球应用最广泛的疫苗，也是一种能携带多种致病菌保护性抗原表达的疫苗载体。本研究以ｐＵＣ１９为骨架，分别克隆入ＢＣＧ分泌抗原８５－Ｂ的调节和信号肽序列、Ｎｅｏ基因序列（编码卡那霉素抗性）以及分枝杆菌质粒复制基因，构建成分枝杆菌－大肠杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－８０００。该重组质粒在分枝杆菌（含ＢＣＧ）、大肠杆菌两个系统中均能稳定复制，并能稳定表达卡那霉素抗性。本研究为把ＢＣＧ和其它分枝杆菌发展成为多价疫苗载体打下了基础。
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- 关键词：分枝杆菌穿梭质粒卡介苗基因表达
- 人白细胞介素2基因在大肠杆菌中表达水平的提高及产物初步纯化被引量：2
- 1994年
- 利用双Tac启动子和改造后的人白细胞介素2（IL－2）cDNA，提高了IL－2在大肠杆菌（E．Coli）中的表达水平，并经包涵体制备、分子重新折叠及分子筛层析等技术，对表达的IL－2进行了提取、活性恢复与纯化，纯度可达95％。本工作为用基因工程方法生产人IL－2积累了经验。
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- 关键词：基因表达大肠杆菌白细胞介素2
- 利用核酸外切酶Ⅲ体外缺失法构建PTLIL-2△n系列缺失质粒被引量：3
- 1992年
- PTLIL-2是一个含有人白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)cDNA克隆的细菌质粒,含有该质粒的宿主菌虽然表达IL-2,但表达效率不理想。我们利用核酸外切酶在Ⅲ(exonucleaseⅢ,ExoⅢ),采用两种不同的方法,缺失IL-2 cDNA 3′端非编码顺序,获得了含有IL-2片段长度不同的系列缺失质粒PTLIL-2△n;并从中筛选出数个较高效表达IL-2的质粒。该两法简便易行,在基因工程领域中有一定推广价值。
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- 关键词：基因缺失白细胞介素基因工程
- 卡介苗基因组的克隆
- 1996年
- 以质粒pUC19为载体克隆了卡介苗(即卡介菌,BCG)DNA.Sau3Al部分酶解BCG DNA,通过琼脂糖电泳分离2～9Kb DNA片段.BamHl酶切质粒pUC19,碱性磷酸酶去磷酸化.2～9kb DNA片段与pUC19载体用T4连接酶连接转化大肠杆菌HB101,在含氨苄青霉素(Amp)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的LB平板上获得抗Amp白色转化子.随机挑选12个转化子快速提取重组子、电泳检查结果:其中8个分子量扩大.选择5个分子量扩大重组子经BamHl酶切,电泳分析表明DNA插入片段约在2～7kb之间.
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- 关键词：卡介苗基因组质粒克隆结核菌苗
- 一种快速简便的卡介苗基因组DNA提纯方法被引量：1
- 1995年
- 一种快速简便的卡介苗基因组ＤＮＡ提纯方法同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００３０梁驹卿，周火明，张大军，李东，皇甫永穆关键词卡介苗；基因组ＤＮＡ；ＤＮＡ提纯中图法分类号Ｒ３９２－３３．Ｑ３４３．１卡介苗（ＢＣＧ）除广泛用于预...
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- 关键词：卡介苗基因组DNADNA提纯
- 卡介苗载体及其在疫苗研究中的应用被引量：5
- 1993年
- 卡介苗是发展多价疫苗最好的载体之一.把外源基因导入卡介苗有3种途径:一是分枝杆菌噬菌体衍生的基因转移系统;二是分枝杆菌质粒衍生的基因转移系统;三是同源重组基因转移系统.重组卡介苗多价疫苗的研制为各种疾病的预防开辟了广阔的前景.
- 张大军皇甫永穆
- 关键词：基因转移结核菌苗疫苗
- 特异基因的PCR扩增及其快速克隆被引量：4
- 1994年
- 采用聚合酶链反应(PCR)技术，直接从微生物基因组中扩增卡介苗Ag85-B和HBsAg编码基因。虽然在引物5'端设计了限制性内切酶识别顺序以及附加顺序，但因限制性内切酶不能切开这些顺序，使扩增基因产物不能克隆到质粒载体中。因此，我们构建了新的克隆载体即T载体，专门用于克隆未经任何修饰的PCR产物；这种方法价廉，快速有效，值得推广应用。
- 张大军钱明李东梁驹卿皇甫永穆陈秋生
- 关键词：聚合酶链反应克隆T载体基因
