王栋
- 作品数：55 被引量：180H指数：8
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术兵器科学与技术更多>>
- 人p53四价功能域对提高抗体功能性亲和力的作用被引量：8
- 2005年
- 目的探讨人p53四价功能域在提高抗体功能性亲和力和生物学活性方面的的作用。方法利用基因克隆技术,将人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因与前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体基因融合,构建多价抗体(mBsAb),测序正确后,将其亚克隆入真核表达载体进行表达,纯化表达产物,并利用流式细胞仪及51Cr释放试验进行生物学活性测定。结果经酶切、测序分析证实mBsAb构建成功,其真核表达产物分泌于细胞培养上清,相对分子量为67 000,mBsAb与PBMC和PC 3细胞的阳性结合率分别为70. 4%和81%,明显高于BsAb组。51Cr释放试验结果显示, mBsAb激活的T细胞可以裂解PC 3细胞,裂解百分率明显高于IL 2组和BsAb组。结论人IgG3上游铰链区/p53四价功能域基因与抗前列腺癌/抗人CD3双特异性单链抗体基因融合后表达产物的功能性亲和力和生物学活性大大提高,为提高抗体的功能性亲和力和生物学活性开辟了新的思路。
- 王栋武国军谭建明王禾
- 关键词：双特异性单链抗体PC-3细胞人IGG功能域亚克隆基因融合
- 儿童肾移植术后的免疫抑制治疗被引量：1
- 2008年
- 目的探讨长期存活的儿童肾移植受者不同免疫抑制方案的有效性与安全性。方法回顾性分析34例存活5年以上的儿童受者免疫抑制剂使用情况，按所使用的免疫抑制剂不同分为5组：A组：环孢素A＋强的松；B组：环孢素A＋硫唑嘌呤＋强的松；C组：环孢素A＋霉酚酸酯＋强的松；D组：他克莫司＋硫唑嘌呤＋强的松；E组：他克莫司＋霉酚酸酯＋强的松。结果术后按Kaplan-Meier法得出1、3、5年人／肾存活率分别为100％／97％、91％／87．8％、84．4％／80．9％。术后1、3、5年时肾存活的33例、30例和28例中，服用环孢素A者为16／33（48．5％）、18／30（60％）、15／28（53．6％），服用他克莫司者为17／33（51．5％）、12／30（40％）、13／28（46．4％）；服用硫唑嘌呤者为7／33（21．2％）、7／30（23．3％）、9／28（32．1％），服用霉酚酸酯者为26／33（78．8％）、21／30（70％）、17／28（60．7％）。移植1年后环孢素A血浓度谷值100～150ng／ml，他克莫司血浓度1．5～3ng／ml。各组不同时期的环孢素A和他克莫司剂量和浓度均无明显差异。霉酚酸酯剂量维持在10mg·kg^-1·d^-1，强的松5～10mg／d。服药不依从者占30％。移植肾丢失5例，原因分别为排异反应1例，移植肾带功能死亡4例（肺部感染和药物性肝功能损害各2例）。并发症包括高血压（35．7％）、高血脂（28．6％）、感染（17．9％）、牙龈增生（14．3％）、多毛（10．7％）、糖尿病（3．6％）。结论环孢素A／他克莫司、霉酚酸酯、强的松三联免疫抑制治疗是儿童肾移植受者主要的抗排异方案，须定期监测血药浓度，个体化调整剂量。
- 杨顺良吴卫真林文洪徐廷昭蔡锦全陶小琴王庆华王栋高霞谭建明
- 关键词：肾移植免疫抑制剂存活率
- ELISA定量测定sCD30的方法学评价与临床应用被引量：3
- 2007年
- 目的:用ELISA方法评价Bender MedSystems公司的"研究用"human sCD30 ELISA定量测定试剂盒的方法学及其在临床应用。方法:收集到458例尿毒症等待肾移植、淋巴瘤病和一些恶性肿瘤患者及健康成人的血清、尿液、腔积液,采用ELISA定量检测sCD30浓度,并进行比较;另对该方法的精密度、准确性及曲线的线性与测定范围作了观察。结果:249例肾移植术前患者的sCD30浓度为(178.1±80.3)U/ml、11例非霍奇金淋巴瘤患者为(233.3±61.2)U/ml,比58名健康成人(45.5±16.8)U/ml显著增高(P<0.01);而肾移植术前及术后均增高患者在术后1周内发生急排率为38.5%;8例霍奇金病患者和9例恶性肿瘤患者的sCD30分别为(86.1±46.0)和(92.1±40.6)U/ml,也明显高于健康成人(P<0.01)。ELISA定量测定sCD30的批内CV3.9%,批间CV6.3%,回收率为(101.2±2.9)%,线性相关性系数r=0.999 2。结论:ELISA定量测定sCD30方法简便,重复性好,结果可靠,适用于各种体液标本的检测。在以免疫应答为主流的疾病中,血清中sCD30浓度增高常与疾病的活动性加重有关。而从目前接受肾移植的患者血清中的初步结果可以看出其浓度与急性排斥反应相关,有望成为预测排斥风险的有用标志物。
- 曾章新邓章彬王栋王庆华谭建明王水良朱忠勇
- 关键词：ELISA
- 抗前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体的构建及表达被引量：7
- 2003年
- 目的 构建并表达抗前列腺癌 /抗人CD 3双特异性单链抗体 ,观察其生物学活性及临床意义。方法 利用PCR方法及分子生物学基因克隆技术 ,构建抗前列腺癌 /抗人CD 3双特异性单链抗体融合基因 ,测序正确后 ,利用EcoRI和HindⅢ酶切位点 ,将融合基因亚克隆入真核表达载体进行表达 ,表达产物纯化后 ,利用流式细胞仪进行生物学活性测定。结果 经酶切、测序分析证实插入的基因片段大小为 1 5kb ,序列与设计完全一致 ;SDS PAGE和Western印迹实验证明 :表达产物分泌于细胞培养上清 ,相对分子质量为 6 10 0 0 ;流式细胞仪结果显示 :双特异性单链抗体与PBMC和PC 3细胞的阳性结合率分别为 5 4 1%和 5 3 7%。结论 抗前列腺癌 /抗人CD 3双特异性单链抗体具有较好的生物学活性 ,为进一步的体内实验奠定了基础。
- 王栋武国军王禾杨顺良吴卫真徐廷昭谭建明
- 关键词：前列腺癌生物学活性PCR
- 抗人CD3单链抗体四聚体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定
- 2003年
- 目的 将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法 将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论 获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 。
- 武国军王禾王栋于磊王智袁建林张波药立波
- 关键词：SCFV基因HELA细胞T细胞抗原受体
- 抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的活性研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究抗前列腺特异抗原(PSA)/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的生物活性.方法:利用流式细胞仪和51Cr释放试验评价双特异性单链抗体四聚体的抗原亲和活性和体外介导杀伤靶细胞的效果.利用裸鼠前列腺癌模型分析其在体内介导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤的能力.结果:抗PSA/抗CD3双特异性单链抗体四聚体可以特异性结合表达前列腺癌细胞和CD3阳性的淋巴瘤细胞,阳性结合率分别为70.4%和81%.在体外,有细胞毒T淋巴细胞存在时该四聚体可引起前列腺癌细胞的裂解,在抗体浓度固定组和效应细胞/靶细胞比例固定组,靶细胞裂解率分别随着效应细胞/靶细胞比例和抗体浓度的增加而增加,最高裂解率分别可以达到(80.3±5.2)%和(78.6±5.5)%.与对照组比较,接种前列腺癌细胞的裸鼠在体内注射激活的细胞毒T淋巴细胞的同时接受该四聚体的治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P<0.0001).结论:抗PSA/抗CD3双特异性单链抗体四聚体具有良好的生物学活性,具有体外杀伤肿瘤细胞和体内抑制肿瘤生长的作用.
- 王栋陈锦华武国军王禾吴卫真杨顺良林文洪谭建明
- 关键词：前列腺肿瘤抗原CD3抗体亲和力四聚体
- 抗PSA单链抗体/p53四聚功能域融合基因的构建及表达被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建抗人前列腺特异抗原 (PSA)单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因 ,并进行真核表达和活性测定。方法 :利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人 p5 3四聚功能域融合基因 ,克隆入 pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p5 3克隆载体。将抗PSAscFv克隆入pUC19/IgG3/ p5 3载体中 ,构建抗PSAscFv/人p5 3四聚功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后 ,将融合基因克隆入真核表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果 :获得了抗PSAscFv/人p5 3四聚功能域融合基因 ,基因全长 891bp ,可编码 2 97个氨基酸 ,与已发表的抗PSAscFv、人IgG3上游铰链区和人p5 3四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS PAGE和Western印迹实验证实为约 35kD的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC 3细胞 ,亲和力高于scFv。结论 :获得了可与PC 3细胞特异结合的抗PSAscFv四聚体 。
- 武国军王栋于磊王禾郝晓柯袁建林
- 关键词：前列腺特异抗原融合基因
- 双能量三低扫描在冠状动脉成像中的临床应用研究被引量：2
- 2017年
- 目的探讨FLASH双源CT双能量低对比剂量、低对比剂注射流速及低辐射剂量(三低)扫描在冠状动脉成像中的应用。方法选取临床疑似冠心病患者60例随机分为两组,每组30例,分别采用双能量扫描(A组)和常规回顾性扫描(B组)。对比评价两组的图像质量、辐射剂量和最终诊断结果。结果 A组的容积CT剂量指数(CTDIvol)、剂量长度乘积、有效辐射剂量明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B两组图像所测右冠状动脉近端、左冠状动脉前降支近端、回旋支近端及升主动脉根部强化值A
- 王栋常英娟李剑曹丽娜石明国
- 关键词：双能量冠状动脉图像质量体层摄影术
- 抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析被引量：6
- 2001年
- 目的 扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法 从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果 VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论 构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。
- 袁建林王智武国军王禾王栋郝晓柯
- 关键词：单域抗体克隆前列腺癌
- 双源CT双能量与FLASH扫描在肺动脉成像中的对比研究
- 目的:为了比较在FLASH双源CT中双能量肺动脉成像与大螺距炫速扫描(FLASH扫描)肺动脉成像的图像质量、辐射剂量和临床应用价值的不同影响.方法:选取临床疑似肺栓塞需做肺动脉成像患者60例,随机分为双源CT双能量扫描组...
- 王栋
