- 多巴胺通过mTOR-EAAT2通路影响星形胶质细胞谷氨酸摄取能力被引量：2
- 2017年
- 目的:研究多巴胺(dopamine,DA)对星形胶质细胞谷氨酸(glutamate,Glu)摄取能力的影响,以及DA通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)-兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)信号通路对星形胶质细胞Glu摄取能力的影响。方法:采用Amplex Red谷氨酸测定试剂盒检测经过干预的原代皮层星形胶质细胞对Glu摄取含量的变化,RT-q PCR、Western blot和免疫荧光染色等检测EAAT2和m TOR mRNA和蛋白质相对表达量,m TOR拮抗剂雷帕霉素或m TOR兴奋剂MHY1485干预在DA中共培养的星形胶质细胞,检测m TOR和EAAT2的表达情况,以及培养上清液Glu的含量。结果:DA干预的原代星形胶质细胞中m TOR表达下调,EAAT2表达下调,培养上清液Glu水平上升;雷帕霉素干预后,EAAT2表达下调,培养上清液中Glu的含量增加;MHY1485干预后,EAAT2表达上调,培养上清液中Glu的含量下降。结论:DA通过与星形胶质细胞m TOR-EAAT2通路相互作用,减弱星形胶质细胞摄取Glu的能力,引起细胞外Glu蓄积,最终损伤星形胶质细胞的功能。
- 温芳芳徐竹刘乐平杨建静丁赛丹
- 关键词：多巴胺谷氨酸星形胶质细胞
- 多巴胺对轻微型肝性脑病大鼠脑内谷氨酸摄取能力的影响及其发病机制被引量：4
- 2018年
- 目的研究多巴胺（DA）对神经细胞摄取谷氨酸（Glu）能力的影响，以及DA通过通路对轻微型肝性脑病（MHE）大鼠认知障碍的影响。方法45只SD大鼠随机分为对照组，MHE模型组和DA干预模型组∞=15），其中MHE模型组采用硫代乙酰胺（TAA）腹腔注射、DA干预组采用脑室内注射DA、对照组大鼠腹腔注射等渗盐水，每周2次，共8周；采用脑活体微透析检测MHE大鼠和DA干预大鼠的脑内Glu含量变化，实时定量PCR和免疫印迹分析等检测痕量胺相关受体1（TAARl）、兴奋性氨基酸转运子2（EAAT2）基因mRNA和蛋白质相对表达量；TAARl微小RNA（siRNA）和TAARl质粒侧脑室注射MHE大鼠和DA干预大鼠后检测EAAT2表达情况和细胞外Glu水平变化。计量资料是正态分布且满足方差齐性检验，多组问比较采用单因素方差分析；否则多组间比较采用非参数检验。等级资料多组间比较，采用非参数检验。结果MHE大鼠与对照组相比，DA含量在肝组织[（4．90±0．13）ng／g对比（1．20±0．13）rig／g]、血清[（16．32±1．01）pmol／ml对比（5．50±0．82）pmol／m1]和脑组织[（732．45±78．85）ng／g对比（387．00±23．36）ng／g】均显著升高，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。DA干预大鼠在脑室内注射DA后，在40～120min之间细胞外Glu含量显著升高。在MHE大鼠和DA干预大鼠组，TAARl蛋白相对表达量分别为3．72±0．50、4．18±0．43，与对照组的0．96±0．40相比，显著增高，p值均〈0．05，差异均有统计学意义。MHE大鼠和DA干预组大鼠的EAAT2蛋白相对表达水平与对照组相比，显著下降（0．46±0．16对比0．92±0．11，P=0．013；0．51±0．20对比0．92±0．11，p=0．036），差异均有统计学意义。MHE大鼠和DA干预大鼠经TAARlsiRNA干预后脑组织中EAAT2蛋白相对表达量与空载体处理模型组相比上调（0．86±0．142对比0．56±O．060，p=0．028；0
- 温芳芳徐竹刘乐平杨建静丁赛丹
- 关键词：肝性脑病多巴胺谷氨酸
- TAAR1-EAAT2通路抑制乳鼠星形胶质细胞的谷氨酸摄取能力被引量：3
- 2017年
- 目的研究多巴胺(DA)对原代星形胶质细胞谷氨酸(Glu)摄取能力的影响,以及DA通过痕量胺相关受体1-兴奋性氨基酸转运体2(TAAR1-EAAT2)信号通路对星形胶质细胞Glu摄取能力的影响。方法采用Amplex Red谷氨酸测定试剂盒测定经过DA处理的原代星形胶质细胞对Glu摄取含量的变化,反转录PCR检测TAAR1、EAAT2 mRNA水平,Western blot法检测TAAR1、EAAT2蛋白水平;采用TAAR1小干扰RNA(siRNA)和TAAR1质粒转染DA处理后的原代星形胶质细胞,Western blot法检测EAAT2表达水平并采用Amplex Red谷氨酸测定试剂盒测定培养上清液Glu含量。结果 DA处理的原代星形胶质细胞EAAT2水平降低,TAAR1水平增加,培养上清液Glu含量上升。DA处理经TAAR1 siRNA转染后的原代星形胶质细胞,上调EAAT2水平,培养上清液中Glu含量减少;DA处理经TAAR1质粒转染后的原代星形胶质细胞,则EAAT2降低,培养上清液中Glu的含量增加。结论 DA通过影响星形胶质细胞TAAR1-EAAT2信号通路,减弱细胞Glu摄取能力,引起细胞外Glu蓄积,从而损伤星形胶质细胞的功能。
- 温芳芳刘乐平徐竹杨建静丁赛丹
- 关键词：谷氨酸星形胶质细胞
