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马家兴

作品数：1 被引量：0H指数：0
供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇蛋白
  • 1篇亚细胞
  • 1篇亚细胞定位
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇细胞定位
  • 1篇绿色荧光
  • 1篇绿色荧光蛋白
  • 1篇密码子
  • 1篇密码子优化
  • 1篇古菌

机构

  • 1篇山东大学

作者

  • 1篇倪金凤
  • 1篇申玉龙
  • 1篇黄奇洪
  • 1篇马家兴

传媒

  • 1篇微生物学报

年份

  • 1篇2017
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
优化的绿色荧光蛋白在超嗜热嗜酸古菌冰岛硫化叶菌中的表达与应用
2017年
【目的】开发可用于在极端嗜热嗜酸模式泉古菌冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)中进行高效表达的eCGP123(enhanced consensus green protein variant 123)荧光蛋白,并用作S.islandicus的细胞内蛋白定位工具。【方法】绿色荧光蛋白突变体eCGP123具有极高的热稳定性、耐酸性和可逆的荧光特性等。本研究主要对eCGP123的基因根据S.islandicus密码子偏好性进行优化与合成,在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达并研究其蛋白性质;通过在eCGP123的C末端分别融合具有不同细胞内定位的蛋白(包括E.coli来源的Fts Z和S.islandicus来源的Ups E、PCNA1和SiRe_1200等),构建eCGP123及其融合蛋白的表达菌株,用激光共聚焦显微镜分析eCGP123及其融合蛋白在E.coli和S.islandicus活细胞中的亚细胞定位。【结果】我们确认了在E.coli中表达并纯化密码子优化后的e CGP123具有与野生型绿色荧光蛋白相同的吸光值和较高的热稳定性。细胞学分析显示细胞分裂相关蛋白FtsZ和Si Re_1200分别主要定位于E.coli和S.islandicus分裂细胞的中间;鞭毛组分蛋白Ups E呈点状均匀分布,可能定位于细胞膜上;DNA复制滑动夹亚基PCNA1呈区域性点状分布,暗示了DNA复制区域的位置。蛋白的亚细胞定位与预期结果基本吻合。【结论】绿色荧光蛋白e CGP123可以作为报告蛋白,应用于S.islandicus细胞的蛋白定位分析中,可作为该模式菌株中功能基因研究的重要工具,但需要进一步优化条件。
黄奇洪马家兴倪金凤申玉龙
关键词：绿色荧光蛋白密码子优化亚细胞定位
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