张丽娅
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略
- 2004年
- 构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用。聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3Promoter(pCAT3/P)载体。扩增获得oriP全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3/P-oriP、pCAT3/P-FR、pCAT3/P-DS、pCAT3/P-(FR+DS)等,质粒中目的基因的插入方向经鉴定正确。
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- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒目的基因
- EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立
- 2004年
- 目的:建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-1(EBNA1)的肿瘤细胞株,用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法:将1 200 bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中,使用脂质体介导pcDNA3/EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞,通过G418进行阳性克隆的筛选,PCR、RT-PCR进行鉴定。结果:成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株,经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论:EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立,为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型。
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- 关键词：EBNA1肿瘤细胞株EB病毒
- 重组SARS冠状病毒棘突蛋白S1区基因片段的克隆、表达及免疫原性研究被引量：2
- 2005年
- 目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)棘突(spike)蛋白(S蛋白)S1区基因(40～2001bp)分段表达载体,并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增S1区基因,将其定向插入pQE30质粒,在pQE30质粒上将S1切成3段(40～751、746～1344、746～2001bp),均插入pQE30质粒,构建质粒在大肠埃希菌M15中表达,表达产物经亲和层析纯化及WesternBlot和ELISA鉴定。结果构建的3种重组质粒(pQE30/S1a、pQE30/S1b、pQE30/S1c)均高效表达,重组蛋白相对分子质量分别为26700、22500和46000,表达量分别占菌体总蛋白质的35%、35%和30%。3种重组蛋白经Ni亲和层析树脂得到成功纯化。经Western-Blot及ELISA证实,重组蛋白片段S1c(746～2001bp)可以被SARS患者血清所识别。结论成功构建了SARS-CoVS蛋白S1区基因分段表达载体,重组蛋白S1c具有较强的免疫原性,它的获得为下一步疫苗的研制奠定了基础。
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- 关键词：冠状病毒属蛋白质SSARS冠状病毒免疫原性研究基因片段S蛋白
