耿晓松
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：新乡医学院护理学院更多>>
- 发文基金：河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小分子干扰RNA下调HIF-2α基因表达对人肝癌细胞HepG2体外凋亡的机制被引量：1
- 2018年
- 目的 探讨小分子干扰RNA下调缺氧诱导因子-2α基因表达对人肝癌细胞株HepG2体外凋亡的影响,并研究其可能的分子机制.方法 采用不同浓度的氯化钴诱导细胞模拟缺氧,设计合成的特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞48 h后,采用逆转录聚合酶链式反应、免疫蛋白印记方法检测细胞中缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达,流式细胞术观察细胞凋亡率,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9试剂盒检测细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性;免疫蛋白印记法检测凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2、白血病-2相关x蛋白的表达.结果 低氧环境下,缺氧诱导因子-2α表达上调;特异性缺氧诱导因子-2αsiRN A转染HepG2细胞48 h后,转染组缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达下调(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率升高(P<0.05),活性检测显示半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性升高,免疫蛋白印记法检测显示白血病-2表达下调,x蛋白表达上调(P<0.05).结论 特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA可针对性的下调HepG2细胞中缺氧诱导因子-2α的表达,促进HepG2细胞体外凋亡,这一过程可能与下调白血病-2表达、上调x蛋白的表达及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性有关.
- 李伟伟耿晓松孙建伟杨晓煜段树鹏侯丽娟宋新文
- 关键词：肝癌白血病-2X蛋白
- 非酒精性脂肪性肝病患者血清5-羟色胺水平及其影响因素分析被引量：1
- 2018年
- 目的探讨非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者血清5-羟色胺(5-HT)水平及其影响因素。方法选取新乡医学院第一附属医院感染科住院的130例NAFLD患者作为试验组,同期健康体检者60名作为对照组。收集两组患者BMI、血压、血糖、血脂、血尿酸、转氨酶(ALT、AST)和5-HT数据资料,采用t检验或χ2检验比较两组各指标间的差异,通过多因素Logistic回归分析研究相关因素对5-HT水平的影响。用Spearman相关分析血清5-HT水平与NAFLD之间的相关性。结果NAFLD组患者血清5-HT水平较健康对照组显著升高(χ2=35.650,P<0.000);NAFLD组患者血清5-HT水平在年龄、BMI、是否存在血脂异常及高血压病、糖尿病、高尿酸血症之间差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,5-HT与BMI、血脂及血糖有关。血清5-HT水平与NAFLD呈正相关(r=1.235,P=0.001)。结论 NAFLD患者血清5-HT水平较高,5-HT与BMI、血脂及血糖有关。
- 李伟伟耿晓松宋新文
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病5-羟色胺
- Th17细胞及其相关因子在自身免疫性肝炎患者的表达及意义被引量：9
- 2018年
- 目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患者血清IL-17、IL-6、IL-21、IL-22和TNF-α水平变化及临床意义。方法选择本科室65例AIH住院患者和体检中心健康人群45名,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上述人群血清细胞因子的水平,并结合临床资料进行分析。结果 AIH患者血清IL-17、IL-6、IL-21、TNF-α细胞因子水平均明显高于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05);当AIH患者获得临床缓解时,血清IL-17、IL-6、IL-21、TNF-α细胞因子水平低于治疗前水平,但仍明显高于健康对照人群,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-17及TNF-α水平与肝功能损伤指标ALT及AST具有相关性,相关系数r分别为0.457、0.521、0.228、0.759。结论 AIH患者血清细胞因子IL-17、IL-6、IL-21和TNF-α水平同健康对照组相比显著增加,其中IL-17和TNF-α水平与ALT和AST具有相关性。
- 李伟伟耿晓松侯丽娟申保生宋新文
- 关键词：自身免疫性肝炎细胞因子
- 下调HIF-2α基因对低氧诱导的肝癌细胞体外生物学行为的影响
- 2018年
- 目的:探讨下调缺氧诱导因子2α(Hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因对人肝癌细胞株Hep G2低氧状态下增殖、凋亡、细胞周期分布和迁移侵袭力的影响。方法:选取氯化钴(Co Cl2)诱导的人肝癌细胞株Hep G2作为研究对象,构建HIF-2αsiRNA特异性载体,转染低氧环境下的Hep G2细胞,Real-time PCR和Western blot方法分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA和蛋白表达,MTT方法检测转染前后Hep G2细胞增殖,流式细胞术检测转染前后Hep G2细胞凋亡和细胞周期分布,Transwell试验检测转染前后Hep G2细胞侵袭迁移能力。结果:低氧诱导下,肝癌Hep G2细胞HIF-2α表达显著增多;特异性转染HIF-2αsiRNA于低氧环境下的Hep G2细胞后,HIF-2αmRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制、细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G0/G1期细胞比率升高,合成期(S)及合成后期(G2/M)细胞比率降低,细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论:低氧环境下肝癌Hep G2细胞表达HIF-2α增多,特异性siRNA可通过下调低氧环境下Hep G2细胞中HIF-2α基因表达,抑制Hep G2细胞增殖、侵袭迁移,改变细胞周期分布并诱导其凋亡。
- 李伟伟耿晓松申保生杨玉新宋新文
- 关键词：肝癌RNA干扰
- HIF-2α基因沉默对人肝癌细胞株HepG2增殖能力的影响被引量：3
- 2017年
- 目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factors-2α,HIF-2α)表达水平对人肝癌细胞株HepG2增殖能力的影响。方法用氯化钴(CoCl_2)诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl_2浓度不同分为50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L组,选择CoCl_2浓度为200μmol/L模拟肿瘤内缺氧微环境。采用siRNA干扰沉默HepG2细胞中HIF-2α的表达,分别应用RT-PCR、Western blotting方法检测HIF-2αmRNA和蛋白的表达,MTT方法检测HepG2细胞增殖,绘制细胞生长曲线,流式细胞技术观察细胞周期的改变。结果建立细胞缺氧模型,作为低氧组;采用浓度为50 nmol/L的HIF-2αsiRNA转染缺氧环境下的HepG2细胞,作为低氧+HIF-2αsiRNA组,结果显示:低氧组、低氧+Control siRNA组的HIF-2αmRNA和蛋白表达显著高于常氧组和低氧+HIF-2αsiRNA组(P<0.05);细胞生长曲线结果显示:低氧组、低氧+Control siRNA组的光密度值显著高于常氧组和低氧+HIF-2αsiRNA组(P<0.05);细胞周期结果显示:低氧组、低氧+Control siRNA组HepG2细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比率显著低于常氧组和低氧+HIF-2αsiRNA组,合成期(S)及合成后期(G2/M)细胞比率显著高于常氧组和低氧+HIF-2αsiRNA组(P<0.05)。结论缺氧微环境通过促进人肝癌细胞株HepG2细胞中HIF-2α的表达进一步促进HepG2细胞增殖,而针对HIF-2α的靶向siRNA能有效抑制肝癌HepG2细胞中HIF-2α的表达,从而抑制HepG2细胞的增殖。
- 李伟伟耿晓松王宏伟侯丽娟宋新文
- 关键词：缺氧诱导因子-2Α氯化钴RNA干扰肝癌
- siRNA沉默HIF-2α基因影响人肝癌细胞株HepG2增殖与侵袭机制探讨被引量：3
- 2018年
- 目的恶性肿瘤在生长过程中会出现肿瘤内部缺氧微环境,缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和缺氧诱导因子2α(hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)等因子能够适应细胞内缺氧微环境,并对多种基因进行调控,促进肿瘤细胞增殖、迁移侵袭以及放化疗抵抗等。本研究旨在探讨siRNA沉默HIF-2α后对人肝癌细胞株HepG2增殖、侵袭和细胞周期素D1(Cyclin D1)表达的影响。方法 200μmol/L氯化钴(CoCl2)诱导细胞模拟缺氧,作为低氧组,HIF-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞,分为低氧+HIF-2αsiRNA组、低氧+Control siRNA组,Real-time PCR、蛋白质印迹法检测转染48h后各组细胞中HIF-2α、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖,流式细胞术观察细胞周期分布,侵袭试验观察细胞侵袭能力。结果转染特异性HIF-2αsiRNA于HepG2细胞后,低氧+HIF-2αsiRNA组HIF-2α和Cyclin D1mRNA相对表达量分别为0.557±0.082和0.352±0.049,显著低于低氧组1.127±0.069和0.740±0.068,t值分别为13.092和11.391,均P<0.001;HIF-2α和Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.018±0.005和0.338±0.054,显著低于低氧组0.077±0.010和0.613±0.047,t值分别为12.728和9.411,均P<0.001;低氧+HIF-2αsiRNA组HepG2细胞在24、48、72、96和120h的A值分别为0.335±0.045、0.485±0.080、0.631±0.063、0.772±0.055和0.651±0.080,显著低于低氧组0.512±0.061、0.726±0.054、0.836±0.072、0.867±0.077和0.785±0.063,均P<0.001;低氧+HIF-2αsiRNA组穿膜细胞数(37.83±4.920)显著低于低氧组(86.17±7.030),t=13.806,P<0.001;合成期(S期)与合成后期(G2/M期)细胞比率分别为(21.168±2.007)%和(18.187±5.500)%,均低于低氧组(26.048±3.558)%和(27.843±3.193)%,t值分别为2.926和3.719,P值分别为0.015和0.004,G0/G1期细胞比率为(60.645±4.199)%,显著高于低氧组(46.108±4.556)%,t=5.748,P<0.001。结论HIF-2α基因表达水平下降可抑制HepG2细胞增殖侵袭和改变细胞周期分布,可能与下调Cyclin D1的表
- 李伟伟耿晓松孙建伟张彩凤申保生宋新文
- 关键词：肝癌RNA干扰细胞增殖细胞周期素D1
- 靶向沉默DEK对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨靶向沉默DEK对肝癌细胞株增殖及细胞周期的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,待细胞生长至90%融合度时分为空白对照组、小分子干扰RNA(siRNA)对照组和DEK siRNA组。空白对照组细胞正常培养,不做任何处理;siRNA对照组和DEK siRNA组细胞分别在LipofectamineTM2000脂质体介导下进行siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体转染。应用实时定量聚合酶链反应检测HepG2细胞中DEK mRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测HepG2细胞中DEK、Cyclin D1蛋白的表达,四甲基偶氮唑盐法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术观察细胞周期变化。结果空白对照组、siRNA对照组和DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA表达分别为0.826±0.052、0.776±0.051、0.420±0.050,DEK蛋白表达分别为0.691±0.073、0.726±0.061、0.311±0.038,Cyclin D1蛋白表达分别为0.712±0.069、0.780±0.074、0.434±0.039;DEK siRNA组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组HepG2细胞中DEK mRNA及DEK、Cyclin D1蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。DEK siRNA组转染后24、48、72、96、120 h时细胞增殖能力均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组各时间点细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。DEK siRNA组G_0+G_1期细胞所占比例高于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);DEK siRNA组S期、G_2+M期细胞所占比例均低于空白对照组和siRNA对照组(P<0.05);空白对照组和siRNA对照组G_0+G_1期、S期、G_2+M期细胞所占比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析显示,Cyclin D1蛋白表达与DEK mRNA和DEK蛋白表达均呈正相关(r=0.909、0.899,P<0.05)。结论 DEK siRNA可下调HepG2细胞中DEK基因表达,抑制HepG2细胞增殖,改变细胞周期分布,这一过程可能与下调Cyclin D1表达有关。
- 李伟伟耿晓松孙建伟段树鹏宋新文申保生
- 关键词：DEK肝癌小分子干扰RNA细胞增殖
