唐婕
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养的新方法被引量：2
- 2018年
- 建立一种简便、快捷的人胎盘绒毛膜间充质干细胞(human placental chorionic-derived mesenchymal stem cells,hpc MSCs)分离培养方法。用手持电动匀浆器处理人绒毛膜,经酶消化后接种培养,用倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8测定细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面标记,成脂、成骨诱导分化试剂盒鉴定细胞的分化潜能。获得的人胎盘绒毛膜间充质干细胞为成纤维细胞样细胞,呈平行排列或漩涡状生长,高表达CD73、CD105、CD90,而CD34、CD45、CD14、CD19、HLA-DR呈阴性,生长曲线为"S"型,经成骨或成脂诱导后,茜素红染色或油红O染色呈阳性。符合国际细胞治疗学会认可的间充质干细胞标准。建立了人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养新方法,结合了组织块法和酶消化法的优点,为绒毛膜间充质干细胞的应用提供基础。
- 唐书生孙逊沙吴洁莹陆琰陆琰李发涛陈劲松陈劲松
- 关键词：间充质干细胞绒毛膜细胞分离细胞培养
- 人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养:组织块法的优化被引量：1
- 2017年
- 背景:关于人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养方法的研究很多,但是如何简便、快捷获得大量原代培养间充质干细胞的问题尚未解决。目的:探讨优化人胎盘绒毛膜间充质干细胞体外分离培养组织块法的最佳方法。方法:无菌条件下,取正常足月剖宫产胎盘绒毛膜,用匀浆器处理组织块,采用组织块法贴壁分离培养人胎盘绒毛膜间充质干细胞,经初次培养的组织块进行再次接种培养。结果与结论:用电动匀浆器处理人胎盘绒毛膜省时省力,组织分散度和去除红细胞效果好。初次培养和再次培养获得细胞的平均时间分别为(17.73±1.14)d和(10.03±1.30)d。每个Φ100 mm培养皿获得的原代细胞分别为(6.97±0.98)×10~5个和(13.82±1.44)×10~5个。获得的贴壁细胞呈典型的成纤维细胞形态,呈平行或漩涡状生长,高表达CD90、CD73、CD105,而CD45、CD34、CD14、CD19、HLA-DR为阴性。细胞可向成骨、成脂方向诱导分化。结果表明优化的方法能够简便、快捷地处理人胎盘绒毛膜组织,获得大量的原代间充质干细胞。
- 金宇林吴洁莹陆琰陈劲松李发涛唐婕刘东梁绮华李焱汤雪薇谢闺娥吴韶清
- 关键词：绒毛膜间质干细胞细胞培养技术干细胞间充质干细胞细胞培养组织块法
- 改良原代培养方法提高人胎盘绒毛膜间充质干细胞的产量被引量：2
- 2017年
- 目的建立获得大量P0代人胎盘绒毛膜间充质干细胞（hpcMSCs）培养方法。方法从胎盘绒毛膜分离出hpcMSCs，经初次培养和再次培养7d后，将原培养瓶中培养基、未贴壁组织和冲洗生理盐水离心后分别进行再次培养和第3次培养。用倒置显微镜观察细胞形态，CCK-8测定细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞表面标记，成脂、成骨诱导分化试剂盒鉴定细胞的分化潜能。结果获得的hpcMSCs均为成纤维细胞样贴壁细胞，每例胎盘获得（25．54±3．38）×10^个P0代细胞，初次培养、再次培养和第3次培养获得的细胞数分别为（11．73±2．09）×10^6、（11．12±1．42）×10^6和（2．69±0．71）×10^6，培养时间分别为（12．00±0．64）d、（8．87±0．63）d和（12．33±0．80）d。再次培养时间和获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义（均P〈0．05），初次培养和第3次培养的时间差异无统计学意义（P〉0．05），但第3次培养有时间延迟的趋势。3次培养的每培养瓶获得细胞数分别为（1．12±0．15）×10^6、（2．10±0．16）×10^6和（1．04±0．16）×10^6，再次培养获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义（均P〈0．05），初次培养和第3次培养获得细胞数差异无统计学意义（P〉0．05），但第3次培养有细胞数量减少的趋势。3次培养的细胞生长曲线和表面标记的表达率无差异，成骨、成脂诱导分化检测均呈阳性。结论一份绒毛膜标本，通过3次培养，获得的P0代hpcMSCs细胞数量比初次培养翻倍，本方法可为再生医学提供足够的种子细胞。
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- 关键词：间充质干细胞绒毛膜细胞培养
