冯亚东
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性被引量：6
- 2017年
- C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的数种溶菌酶成员中的一员,是重要的细胞内免疫蛋白,具有稳定的空间结构和显著的抑菌功能,被认为是良好的食品保鲜剂和饲料添加剂。为了开发鱼类来源的C型溶菌酶,研究建立了基于毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)C型溶菌酶的制备方法。首先通过PCR获得5'和3'端分别添加Xho I和Xba I酶切位点的编码斑点叉尾鮰C型溶菌酶的c DNA(cflyC),其编码由127个氨基酸残基组成的多肽;将该cflyC与表达载体p PICZαA连接以构建重组表达载体p PICZαA-cflyC;转化至毕赤酵母X-33后,通过不同浓度的博来霉素和对酵母基因组DNA的PCR鉴定,筛选得到高拷贝的酵母转化子;经0.5%甲醇诱导,在p H6.0、29℃、250 r/min下培养144 h,得到的表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化,得到重组蛋白;经Tricine-SDS-PAGE分析,表明重组蛋白的分子量为15.1 k D;进一步通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,证明该重组蛋白为预期的重组cflyC。通过福林酚法测得重组cflyC的表达量为2.75 mg/L。琼脂糖凝胶扩散法和酶活力测定证明,重组cflyC对枯草芽孢杆菌具有抑菌活性。本研究首次实现了斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达,为其大规模制备奠定了基础。
- 冯亚东陶妍李雯崔旭王强厚
- 关键词：斑点叉尾鮰毕赤酵母抑菌活性
- 斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性
- 溶菌酶是无脊椎动物在先天免疫反应中对抗细菌感染的关键蛋白。本研究通过RT-PCR获得斑点叉尾鮰C型溶菌酶的全长c DNA381bp序列,含保守残基Glu50和Asp67以及8个保守的半胱氨酸残基。将此c DNA片段与表达...
- 冯亚东陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰毕赤酵母抑菌活性
- 文献传递
