高金亮
- 作品数：13 被引量：27H指数：3
- 供职机构：鄂尔多斯市中心医院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 青海血蜱重组蛋白Hq001的结构预测与原核表达
- 2024年
- 目的对从青海血蜱唾液腺cDNA文库中克隆出的1个新基因Hq001编码的蛋白质进行三维理论模型预测,并评估其与Kunitz型蜱源抗凝血蛋白质之间的关系。方法构建重组质粒pET-30a-Hq001并转化至感受态大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,对目的蛋白进行重组表达。使用开源软件AlphaFold v2对去除信号肽的Hq001氨基酸序列进行三级结构预测,以此得到三维理论模型。并使用开源软件GROMACS v2023对三维理论模型进行分子动力学(MD)模拟优化,应用ANOLEA和MolProbity等工具对模型质量进行评价。结果由Hq001构建的重组表达质粒pET30a-Hq001在E.coil BL21中表达后以包涵体形式存在。序列比对与结构建模结果均表明Hq001蛋白具有典型双Kunitz-BPTI型结构域,并与Bikunin、Boophilin、Ornithodorin、Ixolaris等具有抗凝血活性的KunitzBPTI型蛋白具有序列及结构相似性。经过1 ns的分子动力学模拟优化后理论模型均方根偏差在3?左右达到平衡,选取其中能量态最低的结构模型(总能量=-20716640 kJ/mol)作为最终模型。结论蛋白质三维理论模型证实Hq001蛋白具有保守的Kunitz-BPTI型结构域,与来自微小扇头蜱的Boophilin在序列与结构上均较为相似,Hq001蛋白可能具有Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂相似的结构与功能。
- 刘岳青马林源马静陈开廷曹美娜王雪薇王鹏高金亮
- 关键词：青海血蜱分子模拟分子动力学
- 青海血蜱Hq012基因在大肠埃希菌中的表达与纯化
- 2023年
- 目的优化青海血蜱重组Hq012蛋白(rHq012)包涵体的诱导表达和纯化条件。方法从青海血蜱cDNA表达文库中克隆到1个在GenBank中无同源序列的新基因Hq012,构建原核表达质粒pET-30a-Hq012并转化大肠埃希菌感受态细胞[Escherichia coli Rosetta(DE3)],用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达rHq012。高压均质机裂解细菌,用6 mol/L盐酸胍溶解包涵体。比较先复性后纯化和先纯化后复性2种方法所得目的蛋白的产量。先复性后纯化即用稀释法复性后再用镍离子亲和层析法纯化蛋白;先纯化后复性即用镍离子亲和层析法纯化后再进行透析法复性。用12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。结果Hq012基因的核苷酸序列长度为759 bp,包含1个486 bp的开放阅读框,编码一个相对分子质量为18500的蛋白质。诱导表达以浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导8 h蛋白表达量最高,包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解。与先纯化后复性相比,先复性后纯化收获的rHq012产量相对较高。镍离子亲和层析纯化后的蛋白质相对分子质量约为17000,与预期的结果一致。结论0.1 mmol/L IPTG诱导8 h是青海血蜱rHq012蛋白的最佳诱导条件,先复性后纯化的方法是蜱源重组蛋白rHq012更优的纯化方法,研究为包涵体蛋白的纯化提供了参考。
- 马婧陈开廷广慧赵文斌杨寅冉高金亮高金亮
- 关键词：包涵体复性纯化
- 包虫病及其诊断技术概述被引量：9
- 2017年
- 包虫病（hydatidosis）又称棘球蚴病（echinococcosis）,是由棘球属（Echinococcus）绦虫的幼虫—棘球蚴（Echinococcus orhydatidcyst）寄生于人兽体内引起的一类严重危害人体健康和畜牧业健康发展的重要人兽共患寄生虫病。目前已确认的棘球属绦虫有5种,即细粒棘球绦虫（E.granulosus,Eg）、多房棘球绦虫（E.
- 李伟高金亮
- 关键词：包虫病免疫学诊断
- 青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白表达及纯化条件的优化
- 2024年
- 目的对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化。方法将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[E.coil BL21(DE3)、E.coil Rosetta(DE3)、E.coil ArcticExpress(DE3)pRARE2],确定最适表达菌株后,对IPTG终浓度(0、0.5、1.0 mmol/L)、诱导温度(20、25℃)及诱导时间(0、2、4、6、8 h)进行优化。最佳诱导条件表达的菌体经高压均质破碎后,采用非变性(变性-复性-过柱)及变性(变性-过柱-复性)两种方式进行Ni-NTA亲和层析纯化。表达及纯化产物均经12%SDS-PAGE分析。结果重组Hq001蛋白最适表达菌株为感受态E.coil BL21(DE3);最适诱导条件为:IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间4 h。非变性纯化方式可获得相对分子质量约为18800的目的蛋白,大小与预期相符。结论采用优化的表达条件及纯化方式可获得青海血蜱唾液腺重组rHq001蛋白。
- 王雪薇陈开廷马静刘岳青高金亮王翠峰
- 关键词：青海血蜱包涵体复性纯化
- 16S rRNA基因序列用于临床非典型细菌的补充鉴定被引量：5
- 2022年
- 目的利用16SrRNA基因序列分析方法鉴定临床非典型细菌,为临床细菌分类鉴定新方法提供补充。方法提取细菌的DNA,自行设计引物并利用PCR技术扩增细菌16SrRNA基因片段,并对扩增片段进行序列测定,利用Blast等在线软件进行序列同源性分析。结果在32株临床非典型细菌中,3株细菌可以鉴定到“属”,29株细菌可以鉴定到“种”,其中2株可以鉴定到“亚种”。结论16SrRNA基因序列分析法是有效的病原细菌分类鉴定的补充。
- 白志鹏曹美娜张娜陈开廷马静刘玉婷马婧高金亮
- 关键词：细菌分类
- 基于线粒体COI、NDI和12S rRNA基因序列的包虫病标本的分子分类学研究被引量：2
- 2017年
- 目的克隆一例临床包虫病标本的线粒体基因COI、ND1和12S rRNA的基因序列,在基因水平上对包虫病病原体进行诊断,分析棘球绦虫线粒体基因序列差异。方法根据Gen Bank中登录的棘球绦虫线粒体基因COI、NDI和12S rRNA的序列信息分别设计3对引物,扩增临床包虫病标本的COI、NDI和12S rRNA基因,并进行测序。对所克隆的目的基因序列进行BLAST分析并与Gen Bank中已收录的部分棘球绦虫的COI、NDI和12S rRNA基因序列进行对比分析,并制做系统发生树。结果从包虫囊液DNA中成功克隆了长度分别为528 bp、1 001 bp和246 bp的基因片段,序列分析表明所克隆的基因片段为多房棘球绦虫的COI、NDI和12S rRNA基因。其中基因COI和NDI可以用于棘球绦虫的种间分类,而基因片段12S rRNA不能用于棘球绦虫的种间分类。结论从基因水平上确诊了此例包虫病患者的病原体为多房棘球蚴。
- 李伟高金亮王洪波
- 关键词：包虫病多房棘球蚴线粒体DNA
- 蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制分子的结构与功能研究进展
- 2023年
- 蜱是一类体外吸血寄生虫,在吸血过程中蜱会向宿主体内释放多种抗凝血物质以保证血液的供应。其中含Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗凝血作用中占主要地位。不同的Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂具有相似的保守序列,但总体结构不同,在凝血级联中通过抑制丝氨酸蛋白酶类的凝血因子而阻断下游凝血因子的活化,以达到抑制凝血的效果。蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂在凝血系统中的靶点繁多且抑制机制各异。本文对该类蛋白酶抑制剂的抗凝靶点及作用机制进行归纳,有助于抗凝和抗血栓药物的研发,同时进一步解释蜱与宿主间的相互作用以及蜱源抗凝药物的药理作用,为预防蜱对宿主的侵害提供参考资料。
- 刘岳青马林源陈开廷高金亮王鹏
- 关键词：抗凝血
- 新建三甲医院前4年鲍曼不动杆菌的分布及耐药性变迁被引量：8
- 2018年
- 目的了解我院新建分院前4年内鲍曼不动杆菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性变迁情况。方法回顾性调查我院2013年8月—2017年8月4年内检出的122株鲍曼不动杆菌的标本来源,科室分布及耐药性,采用WHONET 5.6软件进行统计分析。结果前4年鲍曼不动杆菌的检出率分别为3.7%、8.0%、4.0%和6.1%。主要分离自痰106株(86.9%)、分泌物10株(8.2%)、血液2株(1.7%)等标本。主要来自重症监护室(ICU)58株(47.5%)、内科25株(20.5%)、外科24株(19.7%)、烧伤科7株(7.4%)等科室。第一年鲍曼不动杆菌对13种常用抗菌药物的耐药率均较低,在33.3%以下。第二年除妥布霉素和左氧氟沙星外,对其他常用抗菌药物的耐药率显著升高(P=0),均在77.1%以上。第三、四年耐药率略有下降,妥布霉素下降幅度最大(P=0)。左氧氟沙星在4年内耐药率的变化差异无统计学意义(P=0.426)。未发现替加环素耐药株。4年内多重耐药鲍曼不动杆菌(multidrug resistant Acinetobacter baumannii, MDR-ABA)的检出率分别为8.3%、77.1%、88.5%和83.7%。我院第一例MDR-ABA为患者入院前一周在另一家三甲医院住院治疗期间携带后进入的。结论鲍曼不动杆菌的检出率、对常用抗菌药物的耐药率以及MDR-ABA的检出率均在第一年相对很低的情况下,在第二年骤然升高到接近国内综合性医院报道的数据。标本分布和科室分布在第一年相对均匀分散,在第二年急剧集中到痰标本和ICU。对近期内有在MDR-ABA流行的大型医疗机构就诊经历的患者,可以在入院前进行MDR-ABA筛查,必要时进行隔离,也不失为控制MDR-ABA传播的一种可行办法。
- 张娜曹青凤高金亮李晓华彭召红张洪涛李洪文曹美娜
- 关键词：鲍曼不动杆菌抗菌药物耐药性
- 蜱Kunitz型蛋白酶抑制剂的抗凝机制研究进展被引量：1
- 2021年
- 蜱是一类体外吸血寄生虫,在长期吸血的过程中蜱向宿主体内释放多种抗凝血物质来阻止宿主血液凝固。含有Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制分子是蜱分泌的重要抗凝血物质。不同蜱种体内的抗凝血物质释放的部位、作用的凝血因子以及与凝血因子相结合的位点各有不同。通过对现有蜱源Kunitz结构域的抗凝血物质的综述,为今后发现更多的蜱源Kunitz型抗凝血物质,并在药理水平上研究蜱与宿主之间相互作用的机制提供参考。
- 马静高金亮
- 关键词：抗凝血丝氨酸蛋白酶抑制剂
- CYP2C19基因型对急性心脑血管梗塞患者预后的影响
- 2024年
- 目的探讨急性心脑血管梗塞患者中CYP2C19基因多态性的分布特征及其检测在临床治疗中的指导价值。方法选取2017年12月-2022年12月鄂尔多斯市中心医院收治的225例急性心脑血管梗塞患者作为研究对象,检测CYP2C19基因型,将患者按照对氯吡格雷代谢反应快慢不同分为A组(快代谢型)、B组(中间代谢型)、C组(慢代谢型)。所有患者均接受基础对症治疗、支持治疗及阿司匹林治疗,给予常规剂量硫酸氢硫酸氢氯吡格雷(75 mg/d),比较三组生理生化指标、CYP2C19基因型及术后3个月内不良事件发生情况。结果三组各项生理生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);225例患者携带CYP2C19*2和*3突变杂合子的分别为84例和20例,携带CYP2C19*2和*3突变纯合子的分别为13例和0例。A组*1/*1者104例,*1/*17者4例,B组*1/*2者79例,*1/*3者20例,*2/*17者5例,C组*2/*2者13例。B组心源性再住院发生率高于A组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);三组其余不良事件发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性心脑血管梗塞患者术后应用硫酸氢氯吡格雷抗凝预后一定程度上受CYP2C19基因多态性的影响,CYP2C19基因检测对临床术后抗血小板治疗具有重要的指导价值,需要进一步的研究。
- 曹美娜刘小平郑艳安杨飞玉高金亮
- 关键词：氯吡格雷
