孟凯
- 作品数：29 被引量：42H指数：4
- 供职机构：山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省农业重大应用技术创新课题山东省农业科学院青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一种抑制血清四型禽腺病毒复制的长链非编码RNA及其应用
- 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种抑制4型禽腺病毒（FAdV‑4）复制的长链非编码RNA及其应用。所述lncRNA为lncRNA‑LYGL；所述lncRNA‑LYGL的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。敲低试...
- 孟凯于江王友令袁小远张玉霞杨金兴
- 文献传递
- 基于非洲猪瘟p30和p22两种蛋白的间接ELISA检测试剂盒
- 本发明公开了基于非洲猪瘟p30和p22两种蛋白的间接ELISA检测试剂盒，涉及动物用生物制品制造技术领域。本发明提供一种非洲猪瘟的间接ELISA检测试剂盒，包括氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的p30蛋白和氨基酸序...
- 于江吴家强孟凯矫健任素芳张玉玉刘飞陈智张琳郭立辉
- 禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建
- 2021年
- 禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法。根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1 440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法。结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fiber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1∶6400;批内和批间重复性变异系数均小于5%;构建的间接ELISA试剂盒在4℃环境下放置12个月仍然有效。本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查。
- 潘静孟凯秦晓冰
- 关键词：原核表达间接ELISA
- p53基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miRNA-2127靶向关系的验证被引量：2
- 2019年
- 为了验证miRNA-2127与p53基因的靶向关系,利用生物信息学软件预测p53与miRNA-2127的结合位点,全基因合成法合成该结合位点的野生型与突变型模板,并将其克隆到pmiR-RB-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,构建野生型与突变型重组双荧光素酶报告质粒。将293T细胞分为4组,分别共转染野生型报告质粒+阴性对照(NC)、野生型报告质粒+miRNA-2127、突变型报告质粒+NC、突变型报告质粒+miRNA-2127。检测各组细胞中荧光素酶活性差异,结果显示:共转染了野生型报告质粒+miRNA-2127的293T细胞与共转染了野生型报告质粒+NC组相比,荧光素酶活性显著降低(P<0.05);且突变型报告质粒+miRNA-2127组的相对荧光素酶活性显著高于野生型报告质粒+miRNA-2127(P<0.05),说明miRNA-2127能够靶向调控p53基因,且结合位点位于3′UTR区369—375间。
- 张玉霞袁小远王友令孟凯
- 关键词：P53
- 鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重PCR检测引物对及检测方法和应用
- 本发明涉及病毒检测技术领域，特别涉及鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重PCR检测引物对，还涉及使用引物对的检测方法，引物对的应用。本发明建立的多重PCR体系可准确检测水禽鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒的单一或混合...
- 孟凯王友令袁小远张玉霞杨金星
- 文献传递
- 2016年～2017年山东地区商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒HA基因的分子特征和遗传进化分析被引量：5
- 2018年
- 为了解山东地区商品肉鸡H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株的遗传变异情况,本研究对13株从不同肉鸡场分离的H9N2 AIV的HA基因进行PCR扩增、克隆和测序,并对获得的HA基因序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示:13个分离株的HA裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;8株分离株有8处糖基化位点,其余5株存在个别位点缺失情况;受体结合位点除198位有变异外,其它位点均保守;234位氨基酸均为L,因此具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征。所有分离株HA基因核苷酸同源性为94.1%~99.8%,氨基酸同源性为94.3%~100%。HA基因进化树显示,所有分离株均属于欧亚分支中的A/Chicken/Beijing/1/1994(A/Duck/Hong Kong/Y280/97)亚群,也同属于近几年在中国鸡群中流行的以A/chicken/Zhejiang/HJ/2007为代表的G57分支。以上研究为H9N2亚型AIV的防控和疫苗研制提供了科学参考。
- 袁小远孟凯张玉霞徐怀英李莉艾武杨金兴亓丽红王友令
- 关键词：H9N2亚型HA基因遗传进化
- 不同ELISA试剂盒与PCR法检测鸡新城疫病毒的比对试验与研究被引量：1
- 2018年
- 分别采用A、B、C公司的商品化新城疫病毒ELISA检测试剂盒和PCR法对50份临床疑似新城疫病料进行新城疫病毒检测方法的比对试验与研究,其中以La Sota疫苗株作阳性对照,SPF鸡胚尿囊液作阴性对照。结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒的检测结果与PCR检测结果的阳性符合率分别为:94.1%、91.2%、85.3%;阴性符合率分别为:93.8%、87.5%、81.3%;阴阳性总体符合率分别为:92%、92%、84%。A、B、C三个公司的ELISA抗原检测试剂盒的检测时间分别为4、3、3h。产品价格分别为1800、1300、1100元。由此可以看出,间接ELISA法是一种检测结果准确,成本相对较低,省时省力,适用于大批量的新城疫病毒检测方法。与此同时,不同公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒在敏感性、准确性、试验时长和价格上均存在较大差异,综合分析,B公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒价格适中、敏感性高、准确性高,可以在临床上进行推广应用。
- 孟凯邵明辰袁小远张玉霞王友令
- 关键词：新城疫病毒PCRELISA
- 不同公司ELISA试剂盒与HI法检测鸡新城疫抗体的比较
- 2019年
- 分别采用A、B、C三个公司的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对168份临床免疫鸡血清和标准阴阳性血清进行新城疫抗体监测方法的比对试验与研究,比较间接ELISA和血凝抑制(HI)两种试验方法的相关性。研究结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化间接ELISA抗体检测试剂盒的检测结果与血凝抑制(HI)试验的阳性符合率分别为98%、96.7%、90.2%;阴性符合率分别为86.7%、80%、86.7%;阴阳性总体符合率分别为97%、95.2%、89.9%;A、B、C三个公司的ELISA抗体检测试剂盒的检测时间分别为2.5、3、3h。产品价格分别为1100、800、700元。比较发现,间接ELISA方法是一种快速、敏感、特异的血清学诊断方法,不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒在敏感性、特异性和检测时间上均存在较大的差异,综合分析,B公司生产的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒成本较低,敏感性较高,可以用于临床样本的大规模检测。
- 孟凯袁小远张玉霞李莉王友令
- 关键词：鸡新城疫抗体ELISAHI
- H9N2亚型禽流感病毒扩增引物组及其可视化检测试剂盒与应用
- 本发明属于生物检测技术领域，涉及一种H9N2亚型禽流感病毒扩增引物组及其可视化检测试剂盒与应用。建立了一种特异性强、灵敏度高的检测H9AIV的LAMP‑LFD方法，扩增引物组特异性强，确定以恒温温度63℃为最佳，整个检测...
- 袁小远孟凯张玉霞杨金兴亓丽红艾武
- 文献传递
- 宿主miRNA-2127靶向p53促进禽流感病毒H9N2亚型体外复制的分子机制被引量：1
- 2019年
- 为研究鸡体内miRNA-2127对低致病性禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9N2复制的影响,本研究将化学合成的gga-miR-2127模拟物和抑制剂分别转染DF-1细胞,接种H9N2亚型病毒,检测细胞中病毒含量变化,发现gga-miR-2127能够显著促进病毒的复制。为探索其中的分子机制,用生物信息学软件预测gga-miR-2127的调控位点位于p53基因mRNA的3′UTR区,并用双荧光素酶报告系统对其靶向关系进行了验证。荧光定量RT-PCR法和Western blot试验表明,gga-miR-2127过表达时p53的mRNA水平不变而p53蛋白表达水平降低,细胞天然免疫机能下降。据此推测gga-miR-2127促进H9N2复制的分子作用机理是在p53基因的mRNA转录后,通过gga-miR-2127与其mRNA的3′UTR区结合,抑制p53蛋白的翻译从而抑制抗病毒作用和细胞的天然免疫机能。
- 张玉霞袁小远杨金兴孟凯
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒分子机制
