李静宜
- 作品数：17 被引量：68H指数：5
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技计划项目首都市民健康培育项目更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 利用环介导等温扩增技术检测儿童咽拭子标本中肺炎支原体被引量：7
- 2014年
- 目的采用自行设计的引物,利用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立一种快速检测急性呼吸道感染患儿咽拭子标本中肺炎支原体的方法。方法针对肺炎支原体基因组内存在的重复序列SDC1设计6条特异性LAMP引物(SMP),使用实时浊度仪进行扩增反应并记录结果。对该方法进行灵敏度和特异性检测,并与文献报道的引物(JMP)进行比较。应用该方法和实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测55例儿童咽拭子标本并对结果进行比较。结果本研究中设计的肺炎支原体特异性SMP引物灵敏度高,最低检出肺炎支原体标准株FH的DNA拷贝数为6个。采用SMP引物的LAMP方法特异性好,与其他支原体和细菌间无交叉反应。55例临床标本分别使用SMP引物和JMP引物进行LAMP检测,两种方法的总符合率为98.2%;使用SMP引物的LAMP方法与Q-PCR的总符合率为96.4%。结论采用本研究设计的SMP引物所建立的LAMP方法灵敏度更高,特异性好,较Q-PCR操作简便,耗时短,可用于临床儿童咽拭子标本中肺炎支原体的实验室快速检测,具有良好的临床应用前景。
- 李丹李静宜董艳青任翊田秀君辛德莉
- 关键词：肺炎支原体呼吸道感染儿童环介导等温扩增技术
- 实时定量PCR检测肺炎支原体2063位点点突变的方法学研究被引量：2
- 2013年
- 背景肺炎支原体(MP)是儿童社区获得性肺炎的主要病原体,对目前常用治疗药物——大环内酯类抗生素的耐药率有升高趋势,而传统检测MP耐药株的方法耗时耗力。目的建立一种快速诊断MP感染及耐药表型的新方法。方法采用实时荧光定量PCR技术,以23S rRNA为靶序列,设计不同基因型探针及引物,构建阳性质粒,建立标准曲线。结果实时荧光定量PCR检测敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的下限分别为6和60拷贝数,特异性实验结果显示,仅生殖支原体出现扩增。与23S rRNA巢式PCR测序结果相比,实时荧光定量PCR鉴定43株MP临床分离株2063位点等位基因的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%。12份鼻咽拭子标本实时荧光定量PCR MP阳性检出率为10/12,耐药率为4/12,1份标本同时发现2063A和2063G位点。结论本研究初步建立了一种快速诊断MP感染并判断其耐药基因型的实时荧光定量PCR方法,具有较高的灵敏度。
- 李静宜孙岚秦选光董艳青姜越李丹田秀君辛德莉
- 关键词：大环内酯类聚合酶链反应点突变
- 人型支原体液体培养中pH与活菌浓度关系研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨人型支原体液体培养过程中,培养时间、培养基pH与菌浓度的关系,研究人型支原体液体培养时的生长规律。方法用精密pH计定时测定人型支原体培养过程中培养基pH值,同时观察培养基颜色变化;采用微量法测定菌浓度,每3h测定一次,连续测定48h。结果不同浓度的人型支原体在液体培养时呈现相同的生长规律,有类似于细菌的生长曲线,最大菌体浓度(CCU)109/ml;人型支原体生长与培养基pH相关,pH 6.8时,菌体活性最高,培养基呈橙红色;pH>7.0时,菌体活性逐渐下降,pH 7.2时,培养基呈深红色,不再发生明显的颜色改变,人型支原体活菌量迅速降低。结论人型支原体液体培养基培养时,培养基pH 6.8、液体颜色橙红时,可获取较佳生长活性的高菌含量培养物。
- 姜越李静宜辛德莉
- 关键词：人型支原体PH
- 1426例成人呼吸系统感染住院患者肺炎衣原体感染状况分析被引量：3
- 2016年
- 目的了解成人急慢性呼吸系统感染患者肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CP)Ig M抗体阳性率在性别、年龄和季节分布上的趋势。方法采用ELISA法检测1426例住院治疗的呼吸系统感染患者血清CP Ig M抗体。结果 1426例CP Ig M抗体阳性率为13.7%;男女患者CP Ig M抗体阳性率差异无统计学意义;各年龄组中,青年组CP Ig M抗体阳性率为37.4%,明显高于中年组和老年组;春、夏季CP Ig M抗体阳性率分别为16.7%和22.5%,明显高于秋、冬季。结论对于在春、夏季出现的急慢性呼吸系统感染的青年患者应考虑CP感染的可能性。
- 李静宜吴赵永徐波辛德莉
- 关键词：肺炎衣原体呼吸道感染酶联免疫吸附实验成年人
- 荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立被引量：12
- 2016年
- 目的建立检测肺炎支原体的荧光定量PCR法,并与市售试剂盒和传统巢式PCR法的检测性能进行比较。方法设计针对肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征毒素基因的特异性引物,构建含相应目的片段的质粒作为标准品,采用SYBR Green染料法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线。通过检测其他细菌和170例儿童临床咽拭子样本,比较新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法在临床应用中的差异。结果新建荧光定量PCR法和巢式PCR法能够检出的肺炎支原体标准株DNA最低模板量为10拷贝,市售试剂盒检出最低模板量为102拷贝。在特异性实验中3种方法均可区分肺炎支原体和其他菌种。在检测的170例儿童临床咽试子样本中,新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法的阳性率分别为60.00%、50.00%和53.53%。新建荧光定量PCR法与市售试剂盒的结果具有高度相关性(r=0.953),2种方法的总符合率为86%,Kappa值为0.729。新建荧光定量PCR法与传统巢式PCR法的结果总符合率为90%,Kappa值为0.797。结论新建荧光定量PCR法与市售试剂盒相比灵敏性更高,特异性相同,成本低;与传统巢式PCR法相比操作简单,耗时短且污染少,具有良好的科研和临床应用前景。
- 郭东星胡文娟李丹李静宜栗绍刚吴赵永田秀君辛德莉
- 关键词：肺炎支原体呼吸道感染儿童
- 枳实提取物及其药效组分对ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达和NO释放的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:研究枳实提取物及其药效组分橙皮苷和新橙皮苷对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,Ox-LDL)损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells line,HUVEC)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达和一氧化氮(nitric oxide,NO)释放的影响。方法:体外培养HUVEC,50μg/mL ox-LDL制造HUVEC损伤模型。以MTS染色法检测细胞毒性确定用药浓度。细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1的含量,试剂盒测定细胞培养上清液中NO含量。结果:①枳实提取物小于等于2 mg/mL时,橙皮苷浓度小于等于0.03125 mg/mL时,新橙皮苷浓度小于等于0.25 mg/mL时,HUVEC存活率分别大于80%。②2.0 mg/mL和1.0 mg/mL两个浓度的枳实提取物、15.625μg/mL的橙皮苷和0.2500 mg/mL新橙皮苷对ox-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达有显著抑制作用。③2.0 mg/mL枳实提取物显著提高ox-LDL诱导的HUVEC和正常HUVEC培养液中的NO含量;7.813μg/mL、15.625μg/mL和31.250μg/mL 3个浓度的橙皮苷能显著提高ox-LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量,31.250μg/mL的橙皮苷能促进正常HUVEC的NO释放;0.2500 mg/mL和0.1250 mg/mL 2个浓度的新橙皮苷能显著提高ox-LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量。结论:枳实提取物及其药效组分橙皮苷、新橙皮苷能抑制ox-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达,促进ox-LDL诱导的HUVEC的NO释放。
- 罗容吴霞李静宜崔湖荣张楠张贵君
- 关键词：橙皮苷新橙皮苷细胞间黏附分子-1
- 应用MALDI-TOF-MS技术分析阿奇霉素耐药和敏感肺炎支原体蛋白的表达差异
- 目的 应用MALDI-TOF-MS技术分析阿奇霉素耐药和非耐药肺炎支原体蛋白的表达差异.方法 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析分离自肺炎支原体肺炎患儿的阿奇霉素耐药的肺炎支原体株1...
- 李静宜王屹姜越李丹郭东星田秀君申阿东辛德莉
- 关键词：肺炎支原体MALDI-TOF-MS
- 106例宫颈炎患者支原体检测及抗生素敏感性分析被引量：12
- 2014年
- 目的:对本地区宫颈炎患者解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)进行监测,分析抗生素敏感情况,为临床诊疗提供实验依据。方法:无菌采集宫颈炎患者宫颈分泌物,用支原体培养、鉴定、药敏试剂盒进行培养和药敏试验。结果:支原体总检出率为71.70%。Uu检出率为52.83%,Uu合并Mh检出率16.04%,Mh检出率为2.83%。56例单纯Uu株体外抗生素敏感性显示:对四环素族多西环素100%、美满霉素98.21%高度敏感;对大环内酯类敏感性不一:克拉霉素96.43%,阿奇霉素91.07%,交沙霉素76.79%,红霉素67.86%,罗红霉素32.14%;对喹诺酮类如加替沙星83.93%较敏感,而对左氧氟沙星,司帕沙星敏感性差;对克林霉素和甲砜霉素不敏感;17例Uu合并Mh的抗生素敏感性为:美满霉素100%,多西环素100%,交沙霉素88.23%,加替沙星64.7%,对左氧氟沙星、司帕沙星、红霉素、阿奇霉素、克拉霉素,罗红霉素、甲砜霉素、克林霉素均不敏感。3株单纯Mh例数少未做统计。结论:宫颈炎患者中支原体检出率较高,其中单纯Uu检出率较Uu、Mh混合阳性率高,对四环素类、大环内酯类族中的多数抗生素敏感,治疗选择余地大。Uu、Mh混合敏感性抗生素种类少,应优先选择四环素类抗生素治疗。
- 李静宜金影姜越辛德莉
- 关键词：宫颈炎支原体药敏试验
- 肺炎支原体感染认识新进展被引量：3
- 2012年
- 肺炎支原体在各个年龄段都是明确的呼吸道致病菌,它通过极样黏附细胞器吸附在宿主细胞表面,产生过氧化物离子和可能的外毒素,甚至可能直接入侵宿主细胞导致潜伏感染。诱发的免疫反应性损伤也是肺炎支原体引起临床症状的主要因素之一。肺炎支原体诊断最好结合PCR和血清学检测,而且鼻咽和口咽标本同时取材进行PCR检测,不同病程2次血清学检测能获得最可靠的诊断依据,培养方法对于肺外支原体感染和体外药物敏感试验十分重要。
- 任翊李静宜田秀君辛德莉
- 关键词：肺炎支原体免疫反应耐药
- 宫颈炎239例分泌物支原体检测及抗生素敏感性分析被引量：11
- 2015年
- 目的对门诊宫颈炎患者解脲脲原体(解脲支原体)和人型支原体(人型支原体)进行分析,了解抗生素敏感情况,为临床诊疗提供实验依据。方法无菌采集宫颈炎患者的宫颈分泌物,支原体相关试剂盒进行支原体的培养、鉴定和药物敏感试验。结果支原体总检出率为47.3%。解脲支原体检出率为33.10%,解脲支原体合并人型支原体检出率为13.0%,人型支原体检出率为1.3%。79例单纯解脲支原体株体外抗生素敏感性显示:对四环素族多西环素97.5%,美满霉素97.4%高度敏感;对大环内酯类敏感性不一:克拉霉素94.9%,阿奇霉素75.9%,交沙霉素96.2%,红霉素44.3%,罗红霉素32.9%;对喹诺酮类如加替沙星89.9%较敏感,而对左氧氟沙星,司帕沙星敏感性差;对克林霉素和甲砜霉素不敏感;3例人型支原体的抗生素敏感性为对四环素族多西环素、美满霉素100%敏感,对交沙霉素和克林霉素100%敏感,31例解脲支原体合并人型支原体的抗生素敏感性分别为:美满霉素83.9%,多西环素87.1%,交沙霉素83.9%,加替沙星35.5%,对司帕沙星、左氧氟沙星、司帕沙星、阿奇霉素、红霉素、克拉霉素,罗红霉素、克林霉素敏感性低。结论宫颈炎患者中支原体检出率较高,其中单纯解脲支原体检出率较解脲支原体、人型支原体混合阳性率高,对四环素类、大环内酯类族中的多数抗生素敏感,治疗选择余地大。解脲支原体、人型支原体混合敏感性抗生素种类少,可选择四环素类或大环内酯类抗生素治疗。
- 陈瑛李静宜辛德莉
- 关键词：宫颈炎支原体药物敏感试验
