- DENV-2感染的HUVECs与人CD4+T细胞相互作用对主要粘附分子和抑炎性细胞因子表达的影响
- 目的:探讨DENV-2感染的HUVEC与CD4+T细胞的相互作用分别对HUVECs表达粘附分子ICAM-1、VCAM-1 mRNA和CD4+T细胞表达IL-10、TGF-β1mRNA产生的影响,以进一步了解登革病毒感染的...
- 王克
- 关键词：CD4+T细胞2型登革病毒
- 文献传递
- Ⅱ型登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4~+T细胞相互作用对主要粘附分子和抑炎性细胞因子mRNA表达的影响
- 目的:探讨2型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）与CD4+T细胞的相互作用分别对HUVECs表达粘附分子ICAM-1、VCAM-1 mRNA和CD4+T细胞表达IL-10、TGF-β1mRNA...
- 王克左丽张妮
- 关键词：人脐静脉内皮细胞CD4~+T细胞2型登革病毒
- 文献传递
- 登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4＋ T细胞相互作用对黏附分子和抑炎细胞因子表达的影响
- 2017年
- 目的 探讨Ⅱ型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）与CD4＋T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1） mRNA和 CD4＋T细胞表达IL-10、TGF-β1 mRNA产生的影响,以进一步了解DENV感染的免疫学机制.方法 S1P1选择性激动剂CYM-5442处理HUVECs 24 h,用103半数组织培养感染剂量（TCID50）的DENV-2感染HUVECs后与人CD4＋T细胞共培养.于4、8、12、24、48及72 h,分别收集细胞样本,用real-time PCR检测DENV-2非结构蛋白1（NS1）、鞘氨醇激酶1（SPHK1）、ICAM-1、VCAM-1、IL-10、TGF-β1 mRNA表达变化.结果 HUVECs被DENV-2感染后,病毒NS1 mRNA的表达呈一定时效性,在24 h达到高峰.在DENV-2感染的不同实验组中,CYM-5442处理和未处理组,DENV-2 NS1 mRNA的表达均无明显差异.HUVECs被CYM-5442处理和DENV-2感染后,SPHK1 mRNA表达明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;在DENV-2感染的HUVECs与CD4＋T细胞共培养的情况下,HUVECs ICAM-1和VCAM-1 mRNA高表达,相对HUVECs仅被DENV-2感染组和未处理组差异有统计学意义（P〈0.01）,CD4＋T细胞TGF-β1 mRNA表达无明显差异,IL-10 mRNA表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 实验证明DENV-2能在HUVECs内复制增殖,CD4＋T细胞可抑制DENV-2增殖;CD4＋T细胞对DENV-2感染的HUVECs产生黏附分子VCAM-1和ICAM-1有明显的促进作用,CD4＋T细胞可促使HUVECs活化,增强炎症反应,这可能与DENV-2感染诱发血管通透性升高有关.DENV-2感染的HUVECs对CD4＋T细胞IL-10 mRNA表达有一定上调作用,对TGF-β1的表达没有明显的影响.
- 王克左丽张妮袁静孔维莹毛佳旋陈俊豪
- 关键词：人脐静脉内皮细胞CD4+T细胞
- DENV-2诱导HUVECs自噬和影响细胞活力的研究被引量：6
- 2018年
- 目的:通过利用登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,研究病毒诱导HUVECs产生自噬和对细胞活力的影响。方法:利用DENV-2 NGC株感染HUVECs,Real-time PCR检测HUVECs中DENV-2 NS1基因部分系列的表达,给予自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)和自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理观察细胞自噬通量变化,激光共聚焦显微镜观察自噬体形成;CCK-8检测细胞活力;Western blot检测自噬通量标志性蛋白LC3、P62的蛋白表达量。结果:DENV-2感染HUVECs组病毒NS1基因在各时间点均有表达;被感染的HUVECs在24 h时细胞活力下降不明显,36、48 h细胞活力分别下降至未处理组82.46%和78.47%,差异具有显著统计学意义(P<0.05);HUVECs被DENV-2感染后,LC3-Ⅱ蛋白量表达明显增高,自噬底物P62表达明显降低,36、48 h时间点相较未处理组具有统计学意义(P<0.05),与RAPA处理组结果相似(P>0.05)。CQ处理组LC3-Ⅱ及P62蛋白量表达均明显升高,36、48 h时间点相较未处理组具有显著性差异(P<0.05)。HUVECs被DENV-2感染36 h,激光共聚焦显微镜观察到LC3-Ⅱ表达明显高于未处理组,自噬诱导剂RAPA处理HUVECs后,LC3-Ⅱ表达明显增加,自噬强度更加明显。DENV-2与CQ联合处理组相较DENV单独处理组,36 h细胞活力下降了13.61%,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:DENV-2感染可抑制HUVECs的生长;而DENV-2诱导HUVECs产生的自噬却有利于HUVECs的存活。
- 毛佳璇左丽孔维莹张妮王克袁静陈俊豪来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞自噬细胞活力
- DENV-2感染的HUVECs与CD4^+T细胞相互作用对炎性细胞因子产生的影响被引量：4
- 2017年
- 目的:研究原代人脐静脉内皮细胞(Primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染,与CD4^+T细胞共培养后,对产生主要炎性细胞因子的相互影响。方法:密度梯度离心法提取浓缩白细胞中的PBMC,免疫磁珠法阴性分选CD4^+T细胞,流式检测细胞表面CD3,CD4分子的表达和CD4^+T细胞的纯度。HUVECs经S1P1特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h,加入10~3TCID50的DENV-2感染后,与CD4^+T细胞共培养,Real-time RT-PCR动态检测DENV-2感染HUVECs后病毒NS1基因及IL-6、IL-8的mRNA和CD4^+T细胞内IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-γ的mRNA相对表达量;双抗体夹心ELISA法检测培养上清IL-6、IL-8的表达。结果:流式检测经免疫磁珠阴选的CD4^+T细胞纯度为(98.02±0.32)%。DENV-2感染HUVECs后病毒NS1基因相对表达逐渐增加,在24 h(3.03±0.26,P<0.001)达到峰值后下降,而感染DENV-2后与CD4^+T细胞共培养组的NS1基因相对表达量低于感染组,且呈下降趋势。感染后IL-6和IL-8表达均有上调,与CD4^+T细胞共培养后,IL-6和IL-8在各时间点表达均明显升高(P<0.01)。CYM-5442预处理的共培养感染组中,IL-6在24 h(28.91±2.34,P<0.05)、36 h(19.36±0.1,P<0.05)和72 h(13.84±0.82,P<0.05)显著下降,IL-8表达显著下降。与感染后的HUVECs共培养后CD4^+T细胞的IL-4、IL-17、TNF-α、IFN-γ的mRNA表达均明显升高。结论:DENV-2能感染原代HUVECs;与CD4^+T细胞共培养后NS1的表达被抑制。CD4^+T细胞不仅能增强被DENV-2感染的HUVECs的活化,同时也能被感染后的HUVECs活化。
- 张妮左丽王克袁静
- 关键词：登革病毒CD4^+T细胞
