王鸣
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目中华国际医学交流基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二甲双胍逆转低氧诱导的胰腺癌细胞铁死亡抵抗及潜在的作用机制被引量：6
- 2020年
- 目的:探讨二甲双胍是否能够逆转低氧诱导胰腺癌细胞对铁死亡诱导剂的抵抗,并进一步明确其作用机制。方法:人胰腺癌Patu8988细胞分别在常氧和低氧下培养不同时间(0、12、24、48 h),CCK-8法检测细胞增殖,免疫印迹法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白表达;用不同浓度铁死亡诱导剂Erastin分别处理常氧和低氧培养的Patu8988细胞,CCK-8法检测细胞活性;低氧培养的Patu8988细胞分别给予以下处理:对照组、二甲双胍、Erastin、二甲双胍联合Erastin,用CCK-8法检测细胞活性,免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达;用不同浓度二甲双胍处理低氧培养的Patu8988细胞,免疫印迹法分别检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK),雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR),HIF-1α等蛋白表达。结果:与常氧组相比,低氧抑制细胞增殖,且呈时间依赖性,在48 h差异最显著(P<0.05);Erastin浓度为10μmol/L时,低氧组细胞活性明显低于常氧组(P<0.05),为最佳实验浓度;低氧条件下,与单药处理组相比,二甲双胍联合Erastin可以显著抑制细胞活性,降低GPX4蛋白表达水平(P均<0.05);二甲双胍能够激活AMPK,抑制mTOR磷酸化以及HIF-1α蛋白水平(P均<0.05)。结论:二甲双胍能够通过AMPK-mTOR轴减少HIF-1α表达,从而逆转低氧诱导的胰腺癌细胞铁死亡抵抗。
- 蔡晓杰王鸣高洁姜伟宋廉张礼荣龚爱华朱海涛王冬青
- 关键词：二甲双胍胰腺癌低氧腺苷酸活化蛋白激酶化疗抵抗
- 外源性HMGB1/mtDNA促进放疗残存胰腺癌细胞侵袭与迁移的作用及其机制被引量：2
- 2021年
- 目的探讨放疗诱导胰腺癌细胞释放的高迁移率族蛋白B1/线粒体DNA(HMGB1/mtDNA)对残存胰腺癌细胞侵袭与迁移的作用及其机制。方法不同剂量(0、8 Gy)X射线处理胰腺癌PaTu8988细胞后,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测放疗后上清HMGB1浓度、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测放疗后上清mtDNA相对拷贝数。将放疗处理的胰腺癌细胞、外源性重组人高迁移率族蛋白B1(rhHMGB1)/mtDNA分别与PaTu8988细胞共培养,Transwell检测侵袭与迁移细胞数。外源性rhHMGB1/mtDNA培养PaTu8988细胞,蛋白质印迹法检测环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白水平变化;qRT-PCR检测干扰素-β(IFN-β)转录水平变化。同时构建HMGB1低表达(sh-HMGB1)、mtDNA部分缺失(ρ0)胰腺癌PaTu8988细胞株,放疗后与PaTu8988细胞共培养,蛋白质印迹法检测TBK1蛋白磷酸化水平变化。结果放疗诱导HMGB1(t=-18.429,P<0.001)和mtDNA相关基因COX1(t=-12.370,P=0.006)、COX2(t=-8.503,P=0.014)和COX3(t=-10.321,P=0.009)释放至胰腺癌细胞外。放疗的胰腺癌细胞与rhHMGB1/mtDNA均能够促进PaTu8988细胞的侵袭与迁移(t=-4.016,P=0.015;t=-0.563,P=0.006;t=-25.489,P=0.001;t=-19.157,P=0.003)。外源性rhHMGB1/mtDNA抑制PaTu8988细胞中cGAS(t=2.895,P=0.048)、STING(t=-13.354,P=0.005)、p-TBK1(Ser172)/TBK1(t=-7.347,P=0.012)和p-IRF3(Ser396)/IRF3(t=-3.698,P=0.021)蛋白的表达;同时降低了PaTu8988细胞中IFN-β的转录水平,t=3.186,P=0.033。结论放疗促进胰腺癌细胞释放HMGB1和mtDNA至胞外;放疗诱导的HMGB1/mtDNA通过抑制cGAS-STING通路的激活和IFN-β的生成促进残存胰腺癌细胞的侵袭与迁移。
- 马秋莲王鸣石卉郭亚欣龚爱华朱海涛张礼荣
- 关键词：胰腺癌迁移
- 高迁移率族蛋白B1调控放疗残存胰腺癌细胞的干性获得被引量：1
- 2017年
- 目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对放疗后残存胰腺癌细胞的干性转化作用。方法:酶联免疫吸附实验(ELISA)检测在不同放疗剂量下(0、4、8、10、12 Gy)胰腺癌SW1990细胞上清液中HMGB1的含量;通过不同剂量(0、4、6、8、10 Gy)放疗后,流式细胞术检测残存SW1990细胞获得CD133^+细胞的比例;获取10 Gy放疗剂量下SW1990细胞的上清液,然后将8 Gy放疗后残存SW1990细胞分成4组:PBS组、上清液+EP(ethyl pyruvate,丙酮酸乙酯,为胞外HMGB1特异性抑制剂)组、上清液组、HMGB1(100 ng/mL)组,流式细胞术检测各组细胞CD133^+细胞的比例,同时蛋白质印迹实验检测干性标志分子SOX2和OCT4蛋白表达。结果:ELISA结果显示,胰腺癌SW1990细胞上清液中HMGB1的浓度在10 Gy放疗剂量时最大(217.3±34.97)ng/mL。流式细胞术检测结果显示,在8 Gy放疗后SW1990细胞中CD133^+细胞比例最大(22.63±0.74)%。同时流式细胞术检测结果显示,上清液+EP组、上清液组、HMGB1(100 ng/mL)组中CD133^+细胞相对于PBS组的比值分别是2.2±0.11、3.2±0.19和6.4±0.32(F=143.4,P<0.01)。蛋白质印迹结果显示,上清液组与HMGB1(100 ng/mL)组中干性相关蛋白SOX2和OCT4的表达明显上调(P<0.01)。结论:放疗后胰腺癌SW1990上清液中存在HMGB1,并且HMGB1会调控残存SW1990细胞干性的获得。
- 宋廉张雅宁陈雪莲朱丽石卉王鸣朱海涛张礼荣王冬青
- 关键词：放疗高迁移率族蛋白B1胰腺癌CD133
- 内源性HMGB1调节低氧乏养胰腺癌细胞脂肪酸代谢及其机制被引量：3
- 2021年
- 目的研究内源性高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在低氧乏养胰腺癌细胞脂肪酸代谢重编程及线粒体融合/分裂中的作用及机制。方法GEPIA数据库分析胰腺癌组织中HMGB1表达水平与胰腺癌患者生存率的相关性;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验分别检测内源性HMGB1对低氧乏养Patu8988细胞增殖、侵袭及迁移的作用;激光共聚焦显微镜观察Patu8988细胞线粒体形态的改变;蛋白质免疫印迹法检测细胞线粒体融合/分裂相关蛋白、脂肪酸从头合成相关蛋白表达水平的影响。结果GEPIA数据库分析结果表明HMGB1在胰腺癌中高表达(P<0.01),且表达水平与胰腺癌患者生存时间呈负相关(P=0.00097);干扰低氧乏养Patu8988细胞的HMGB1后,细胞增殖、侵袭及迁移能力降低,Patu8988细胞线粒体形态分裂增加,线粒体分裂相关蛋白FIS1表达增加,p-DRP1(Ser637)表达降低,融合相关蛋白MFN1和MFN2表达降低;ACLY、p-ACLY和FASN蛋白表达水平均下降。结论内源性HMGB1可以促进低氧乏养胰腺癌Patu8988细胞线粒体的融合,抑制分裂,维持线粒体的形态和功能,从而上调ACLY蛋白的表达及磷酸化水平,促进Patu8988细胞的脂肪酸(FA)合成,维持胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。
- 高洁吴琪炜宋廉石卉王鸣龚爱华王冬青朱海涛
- 关键词：高迁移率族蛋白B1胰腺癌
- CXCL12-CXCR4轴促进胶质母细胞瘤前神经间质转化被引量：3
- 2020年
- 目的:探讨CXC趋化因子配体12-CXC趋化因子受体4(CXC chemokine ligand 12-CXC chemokine receptor 4,CXCL12-CXCR4)轴对脑胶质母细胞瘤前神经间质转化的作用。方法:分析TCGA-GBM基因数据库中CXCR4 mRNA在不同胶质瘤分子分型肿瘤组织中的水平差异及其对肿瘤患者生存率的影响;人胶质瘤LN428、U87MG细胞经不同浓度CXCL12(0、20、40、60、80、100 ng/mL)及20μmol/L普乐沙福(选择性CXCR4拮抗剂)预处理48 h,免疫印迹实验检测细胞内OLIG2、E-钙黏蛋白、YKL-40、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,CCK8法和克隆形成实验检测肿瘤细胞增殖能力。结果:TCGA-GBM数据库分析结果显示,与健康者相比,胶质瘤患者CXCR4 mRNA表达显著增高,且与患者生存率呈负相关;间质型胶质母细胞瘤组织标本中CXCR4 mRNA水平显著高于前神经型胶质母细胞瘤(P均<0.05)。与对照组相比,CXCL12组细胞间质型相关蛋白YKL-40、N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平显著升高,而前神经型相关蛋白OLIG2、E-钙黏蛋白表达水平显著降低,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著增强(P均<0.05);给予普乐沙福处理后,与CXCL12组相比,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著降低,且间质型相关指标蛋白表达显著降低,前神经型相关指标蛋白表达显著升高(P均<0.05)。结论:CXCL12-CXCR4轴具有促进胶质母细胞瘤前神经间质转化,及迁移和侵袭、增殖的作用。
- 许学文宋廉杨晓晓石卉龚爱华王鸣张礼荣
- 关键词：胶质瘤分子分型
