娄文静
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院疾病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白1(NS1)基因序列分析及2013上海分离株NS1的原核表达被引量：1
- 2014年
- 目的：对2013年3月发生的感染人的新型H7N9亚型禽流感病毒的非结构蛋白1（NS1）基因序列进行同源性分析,构建NS1重组质粒并表达。方法：从GenBank获得2006-2013年不同来源的H7N9亚型病毒NS1序列,并进行同源性比较;利用PCR方法从H7N9亚型禽流感病毒株A/Shanghai/4664T/2013（H7N9）基因组cDNA中扩增得到全长NS1基因,并将该片段定向克隆到原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pET28a-NS1,经酶切鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后,IPTG诱导表达,且进行Western印迹分析。结果：经序列分析,2013年暴发的H7N9型禽流感病毒的NS1基因核苷酸序列同源性为95%-100%,与之前暴发的H7N9型流感病毒NS1基因序列的同源性为86.4%-90.7%,表明2次暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支;PCR扩增得到约680 bp的NS1基因序列,所克隆的NS1基因在原核细胞中的表达产物主要以包涵体形式存在,SDS-PAGE检测结果表明重组蛋白相对分子质量为25×103,Western印迹分析证实表达产物为H7N9禽流感病毒NS1蛋白。结论：为进一步研究H7N9亚型流感病毒NS1蛋白功能及基于NS1蛋白的抗病毒药物奠定了基础。
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- 关键词：流感病毒原核表达
- H7N9病毒的M1基因序列分析及原核表达被引量：1
- 2015年
- 目的 克隆H7N9禽流感病毒M1并在原核细胞中表达,为进一步研究其生物学特性、免疫学功能及血清学检测奠定基础。方法 用PCR方法从禽流感上海分离株A/Shanghai/4664T/2013（H7N9）c DNA扩增M1基因,并克隆到载体p MD18-T中。经测序证实后,用EcoRⅠ/NdeⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体p ET28a,并转化E.coli BL21（DE3）菌株。取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定及western blot检验。结果 （1）经PCR、测序和酶切鉴定,成功克隆了禽流感H7N9 M1基因;（2）经IPTG诱导的重组质粒p ET28a-M1表达出约为28 k Da的融合蛋白,与预期结果相符;（3）对H7N9型禽流感M1基因序列分析表明,与2013年暴发的H7N9型禽流感病毒M1基因核苷酸序列同源性在95.4%-100%,与2006-2011年间暴发的H7N9型流感病毒M1基因序列同源性在69.0%-89.6%,2013年感染人的H7N9型流感病毒与此前暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支。结论 成功克隆了禽流感H7N9病毒的M1基因,并在E.coli中得以表达。
- 娄文静张道军史云戚丽华靳连群刘雪林宋宏彬张传福
- 关键词：流感病毒原核表达
