孙成娟
- 作品数：14 被引量：56H指数：4
- 供职机构：贵州大学更多>>
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- 从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究被引量：6
- 2017年
- 试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后,转染HEK-293T细胞,36h后观察荧光,分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比,有6处发生了碱基突变,其中5处为有义突变,分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸;PSORTⅡPrediction和荧光共定位试验结果均表明,ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质,约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区,且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中,为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。
- 赵佳福段志强杨远青嵇辛勤王圆圆孙成娟
- 贵州从江香猪FoxO4、PRKAA1基因在不同组织中的表达分析被引量：3
- 2017年
- 为研究FoxO4、PRKAA1基因在从江香猪不同组织中的表达情况,本实验采用实时荧光定量PCR技术,检测FoxO4、PRKAA1基因的mRNA表达量,分析FoxO4、PRKAA1在贵州从江香猪不同组织的差异表达。结果显示,FoxO4基因mRNA在从江香猪所检测的9个组织样中均有表达,其中在脂肪组织中表达量最高,且差异极显著(p<0.01),在背最长肌组织中表达量最低;PRKAA1基因mRNA在从江香猪所检测的9个组织样中也均有表达,其中在肺组织中表达量最高,且差异极显著(p<0.01),在脂肪组织中表达量次之,在背最长肌组织中表达量最低。FoxO4、PRKAA1基因可能在肌内脂肪(IMF)沉积中发挥重要作用,为进一步研究FoxO4、PRKAA1的功能奠定基础。
- 孙成娟许厚强陈伟陈祥周迪赵焕平吴萍张青青陈福
- 关键词：荧光定量PCR
- 日粮能量对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响被引量：3
- 2017年
- 为了研究日粮能量水平对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响,试验在满足蛋白质、氨基酸等营养水平的前提下,选取10头年龄、体重接近的从江香猪,随机分为高能量(14.35 MJ/kg)组和低能量(12.26 MJ/kg)组,测定生长性能和血液生化指标。结果表明:日粮能量对从江香猪生长性能的影响不显著(P﹥0.05);但对血液生化指标有较大影响,低能量组从江香猪血液中的丙氨酸氨基转移酶活性及尿素、钠含量均显著低于高能量组(P<0.05);低能量组天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同工酶、α-羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性及尿酸、钙、镁、磷含量均极显著低于高能量组(P<0.01);低能量组白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B含量等指标均极显著高于高能量组(P<0.01)。说明在满足其他营养条件下,降低日粮能量水平不会降低断奶仔猪蛋白质合成和代谢,还可能提高断奶仔猪的免疫性能,对脂肪代谢也有一定影响。
- 肖伟喻昌毅许厚强孙成娟周迪陈伟
- 关键词：从江香猪日粮生化指标
- 关岭牛MyoD基因原核表达载体的构建及生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- 本实验采用RT-PCR方法克隆关岭牛MyoD基因的CDS区,利用Eco RⅠ、XhoⅠ酶对目的片段与pET32a(+)原核表达载体进行酶切,T4连接酶连接过夜,通过转化,测序,构建重组表达载体,并对该基因进行相关生物信息学分析。实验结果获得了关岭牛Myo D基因CDS区,成功构建了p ET-32a(+)-MyoD重组表达载体。MyoD基因编码区为954 bp,编码318个氨基酸,共有31个稀有密码子,表达蛋白大小为34.2 kD。该蛋白为水溶性蛋白,等电点p I=5.8,在体内带负电,二级结构中α-螺旋、无规则卷曲较多。蛋白没有信号肽和明显的跨膜区,为胞内蛋白,主要存在于细胞核中。重组载体表达的Myo D蛋白带有His等标签,蛋白大小为53.6 kD,共497个氨基酸。实验对关岭牛Myo D蛋白的理化性质、结构特点进行了初步分析,以期为研究牛MyoD蛋白特性及其作用机制奠定理论基础。
- 夏丹许厚强陈伟陈祥周迪张雯桓聪聪赵焕平张青青孙成娟
- 关键词：原核表达载体生物信息学
- 猪肉质性状相关基因FoxO4、PRKAA1的克隆表达及功能研究
- 本论文以贵州从江香猪为试验动物，采用PCR技术、实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）、分子克隆、细胞培养、细胞转染等技术，对FoxO4、PRKAA1基因分别从分子、细胞水平进行研究。研究结果如下： 1．FoxO4、...
- 孙成娟
- 关键词：基因克隆细胞培养
- 贵州从江香猪PDK4、FGF10基因的克隆及组织表达分析被引量：11
- 2017年
- 试验旨在克隆获得PDK4、FGF10基因,并研究大白猪与从江香猪不同组织中PDK4、FGF10基因mRNA的表达差异。采用RT-PCR分别克隆从江香猪PDK4、FGF10基因并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测PDK4、FGF10基因在大白猪和从江香猪不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,从江香猪PDK4基因的编码区全长1 224bp,编码407个氨基酸;FGF10基因的编码区全长636bp,编码211个氨基酸。经BLAST软件进行同源性比对,发现从江香猪PDK4基因与羊、马、人的核苷酸序列同源性分别为93%、92%和91%;FGF10基因与羊、牛、人、鼠的核苷酸序列同源性分别为94%、93%、93%和90%。由PDK4基因系统进化树可知,从江香猪与牛、绵羊亲缘关系较近;由FGF10基因系统进化树可知,从江香猪与绵羊、牛、人、猕猴亲缘关系较近,与小鼠和鸡亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果显示,在从江香猪不同组织中,PDK4基因在肾脏中的表达量最高,在胃和脂肪中表达量较高,FGF10基因在胃中表达量最高,在肾脏和脂肪中表达量较高,两个基因在背最长肌中的表达量均最低;在大白猪的不同组织中,PDK4、FGF10基因在脂肪中的表达量均最高,PDK4基因在背最长肌中的表达量最低,而FGF10基因在心脏中表达量最低。本试验成功克隆了从江香猪PDK4、FGF10基因,并检测了其在大白猪与从江香猪不同组织中的表达,为进一步研究PDK4、FGF10基因在脂质代谢及脂肪沉积等方面的调控作用提供科学依据。
- 杨洋杨洋许厚强陈伟陈伟周迪徐敏孙成娟张青青赵焕平孙成娟
- 关键词：从江香猪实时荧光定量PCR
- 贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究被引量：7
- 2017年
- 试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorsγ,PPARγ)基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著(P<0.01),在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。
- 张青青许厚强陈伟陈祥周迪夏丹赵焕平孙成娟王圆圆杨洋张鸣
- 关键词：黄牛PPARΓ基因实时荧光定量PCR
- 日粮能量对贵州从江香猪肉质性状的影响被引量：4
- 2017年
- 为研究日粮能量水平对贵州从江香猪肉质指标的影响,在满足蛋白质等营养水平的前提下,选取10头年龄、体重接近的从江香猪,随机平均分为高能量日粮组(14.35 MJ/kg)和低能量日粮组(12.26 MJ/kg)。结果显示日粮能量对从江香猪大部分肉质指标影响差异不显著(P>0.05),但对肌内脂肪含量影响差异显著(P<0.05)。由此可见,降低日粮能量水平不会降低从江香猪断奶仔猪大部分肉质指标。因此,适量降低日粮中的能量水平在从江香猪断奶仔猪实际饲养中是可行的。
- 陈伟肖伟喻昌毅许厚强孙成娟周迪
- 关键词：从江香猪肉质指标
- 猪FoxO4基因cDNA部分序列的克隆及其组织表达被引量：1
- 2017年
- 为探究FoxO4基因序列和组织表达特征,采用RT-PCR法从猪肝脏中克隆FoxO4基因c DNA的部分序列,采用荧光定量PCR对大白猪、从江香猪2个猪品种的不同组织m RNA表达进行了相对定量分析。结果:获得猪FoxO4基因615 bp编码区序列;FoxO4基因m RNA在大白猪所检测的9个组织样中均有表达,在肺中表达量最高,在脂肪中表达量次之;FoxO4基因m RNA在从江香猪所检测的9个组织样中也均有表达,在脂肪中表达量最高,在肺中表达量次之;在2个品种中FoxO4基因在肺、肾、大肠、脂肪中m RNA表达水平差异极显著(P<0.01)。
- 孙成娟许厚强陈伟周迪张青青赵焕平王园园张鸣杨洋吴萍陈福
- 关键词：从江香猪大白猪克隆
- 关岭牛FoxO6基因原核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2017年
- 应用RT-PCR克隆关岭牛FoxO6基因的CDS区,构建重组表达载体并对该基因进行相关生物信息学分析。获得关岭牛FoxO6基因CDS区,成功构建p ET-32a(+)-FoxO6重组表达载体。FoxO6基因编码区为942 bp,编码313个氨基酸,表达蛋白大小为33.60 ku;该蛋白为亲水性蛋白,等电点p I=9.44,在体内带正电,二级结构中主要是无规卷曲和α-螺旋;蛋白没有信号肽和明显的跨膜区,为胞内蛋白,主要存在于细胞核中。重组载体表达的FoxO6蛋白带有His等标签,蛋白大小为53.0 ku,共492个氨基酸。试验对关岭牛FoxO6蛋白的理化性质、结构特点进行了初步分析,为研究牛FoxO6蛋白功能及其作用机制奠定理论基础。
- 赵焕平许厚强陈伟周迪孙成娟张青青杨洋
- 关键词：原核表达载体生物信息学分析
