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心脏发育候选基因PYGO1 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定: 2012年; 利用RNA干扰技术构建PYGO1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒(pSUPER-PYGO1)。首先,针对PYGO1 cDNA序列设计并化学合成一对编码短发夹RNA序列,经退火插入到由BglⅡ和XhoⅠ酶切的pSU-PER质粒上构建重组RNAi质粒pSUPER-PYGO1。通过XbaⅠ酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞系H9c2建立产生逆转录病毒的细胞克隆。通过RT-PCR和Western blot检测pSU-PER-PYGO1对H9c2细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白的干扰效果。pSUPER-PYGO1质粒经酶切鉴定及测序分析,发现59nt寡核苷酸成功插入到预计位点,且序列完全一致;RT-PCR和Western blot检测结果显示转染pSUPER-PYGO1的细胞中PYGO1 mRNA和PYGO1蛋白量明显降低。因此,靶向PYGO1的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨PYGO1在心脏发育中的功能奠定了基础。; 刘明刘宪楚周军媚谢华平廖四芳宋文李佑锋吴秀山王跃群; 关键词：RNA干扰 PSUPER H9C2

Nulp1通过Wnt信号通路调控P19细胞向心肌细胞分化的分子机制研究: 心脏是胚胎发育过程中第一个由中胚层细胞发育形成的器官，并且它的发育包括多个步骤，从未成熟的中胚层细胞分化为心脏中胚层细胞，再由心脏中胚层细胞发育为心肌细胞。因此研究心肌细胞分化具有十分重要的意义，它可以在治疗遗传因素导致...; 宋文; 关键词：心脏发育 WNT信号通路 P19细胞细胞分化; 文献传递

可诱导表达Mesp1的慢病毒载体构建及P19细胞稳定表达系的建立: 2014年; Mesp1属于b HLH转录因子家族,对早期心脏中胚层的形成十分重要。为研究Mesp1在心脏发育过程中的功能,本文构建了可诱导表达Mesp1的慢病毒载体,转染进P19细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后,成功建立起经强力霉素诱导后可稳定过表达Mesp1基因的细胞系P19-Mesp1,为研究Mesp1心脏发育相关功能提供有用的细胞研究模型。; 宋文高建芳陈辉邓云李永青袁婺洲吴秀山戴国王跃群; 关键词：强力霉素 P19 稳定细胞系

抗果蝇MRJ蛋白单克隆抗体的制备和鉴定: 2013年; 制备抗果蝇MRJ蛋白单克隆抗体可用于研究果蝇mrj的生物学功能,使用IPTG诱导重组质粒pET28a-mrj在大肠杆菌Rosetta中表达,重组蛋白经过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化后免疫BALB/c小鼠。然后取免疫好的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选获得了能分泌抗果蝇MRJ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。腹水制备后获得单克隆抗体,通过ELISA和Western Blot对所获得的抗体进行鉴定,结果表明所制备单克隆抗体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的MRJ蛋白,可用于研究mrj基因的生物学功能。; 廖四芳刘丹宋文刘明赵阳唐超吴秀山王跃群; 关键词：细胞融合单克隆抗体

斑马鱼HLRA基因调控心脏左右不对称的发育: 在胚胎发育过程中左右不对称发育对于心脏的环化、瓣膜形成和房室分隔等都非常重要,左右不对称的缺陷会引起错位导致的各种器官功能上的异常.我们发现HLRA基因可能与左右不对称发育有关.以斑马鱼为模型,通过对HLRA的表达研究发...; 谢华平叶湘漓刘明廖四芳宋文袁佳佳吴秀山王跃群

人类成肌发育候选基因ASB12 RNAi稳定细胞系的构建与鉴定被引量：1: 2012年; 目的:利用siRNA表达载体构建抑制人类成肌发育候选基因ASB12表达的pSUPER RNAi载体(pSU-PER-ASB12),筛选构建C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系。方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向成肌发育候选基因ASB12的寡核苷酸链60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、XhoⅠ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER-ASB12)。通过酶切鉴定及测序分析检测构建效果。将正确构建的质粒转染小鼠骨骼肌细胞C2C12,通过G418筛选,免疫荧光检测,RT-PCR分析,建立稳定表达pSUPER-ASB12的细胞系C2C12-pSUPER-ASB12。结果:pSUPER-ASB12载体经酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系可表达绿色荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示C2C12-pSUPER-ASB12细胞中ASB12表达量明显降低。结论:靶向ASB12的pSUPER RNAi载体和C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系构建成功,为进一步从分子水平探讨ASB12在成肌发育中的功能奠定了基础。; 文斗斗周军媚廖四芳宋文胡维新吴秀山王跃群; 关键词：PSUPER RNAI

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宋文