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利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究: 2017年; 目的利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。方法利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。结果成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白。结论利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。; 殷慧慧李丹李钰孙菲董施施孔江峰王洪宝曾林法云智孙兆增; 关键词：黑色素瘤细胞

肿瘤细胞外泌体中融合基因的检测: 2017年; 目的:探究肿瘤细胞分泌的外泌体中是否可以检测到来源于源细胞的融合基因m RNA。方法:培养人非小细胞肺癌NCI-H3122细胞,采用外泌体试剂盒提取细胞上清中的外泌体,并用Western Blot实验验证外泌体是否提取成功。分别提取外泌体以及H3122细胞中的总RNA,将RNA反转录为c DNA,通过PCR反应扩增v1型EML4-ALK融合基因片段,经琼脂糖凝胶电泳确定目的条带后,将两种PCR产物送公司进行基因测序,最后对测序结果进行比对分析。结果:从H3122细胞上清中成功提取了外泌体,并且在外泌体中检测到来源于H3122细胞的m RNA;从H3122细胞外泌体中检测到EML4-ALK融合基因,并发现外泌体中的EML4-ALK融合基因的融合形式为V1,与在H3122细胞中检测到的EML4-ALK融合基因的融合形式完全相同。结论:肿瘤细胞分泌的外泌体中可以检测到肿瘤细胞来源的m RNA,并且外泌体中的m RNA可以反映肿瘤细胞m RNA的基因融合情况等生物学特性。; 殷慧慧郗永义吴晓洁谭招丽崔琮邵勇高丽华法云智胡显文王友亮孙兆增; 关键词：外泌体 EML4-ALK 基因融合 MRNA

Frizzled 3、Frizzled 4基因对黑线仓鼠A:CHA白化性状产生影响的初步分析: 2017年; 为了比较Wnt通路重要结合受体Frizzled家族的Frizzled 3、Frizzled 4受体蛋白基因在黑线仓鼠及其白化突变系(A:CHA)皮肤组织的表达差异,分析这两种基因对白化性状产生的影响,试验提取黑线仓鼠和A:CHA的皮肤组织总RNA,利用普通PCR方法筛选引物,通过实时荧光定量PCR技术比较黑线仓鼠和A:CHA皮肤组织Frizzled 3、Frizzled 4基因表达量的差异。结果表明:黑线仓鼠皮肤中的Frizzled 3、Frizzled 4基因mRNA的相对表达量分别是A:CHA组织中的4倍、5倍。Frizzled 3、Frizzled 4基因在A:CHA皮肤组织中的表达量下调。说明Frizzled 3、Frizzled 4基因与A:CHA白化性状的产生存在一定关联。; 王新刘慧芳易思萌殷慧慧孙兆增; 关键词：黑线仓鼠 FRIZZLED FRIZZLED 实时荧光定量PCR

Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的表达纯化及初步鉴定: 2016年; 目的:构建Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,纯化得到具有生物学活性的目的蛋白。方法:首先从合成的pUC57-CBLB502质粒中扩增出CBLB502基因片段,酶切后克隆至pUC57-Fc质粒中,然后双酶切pc DNA3.1和pUC57-CBLB502-Fc,将CBLB502-Fc基因片段克隆至载体pc DNA3.1,挑选阳性克隆并测序,再将重组质粒转染CHO细胞,筛选高表达细胞系,用免疫印迹鉴定表达情况,Protein A亲和柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,用小鼠辐射试验初步验证目的蛋白的生物学活性。结果:构建了pc DNA3.1-CBLB502-Fc真核表达载体;转染CHO细胞,筛选得到CBLB502-Fc高表达细胞系,并经免疫印迹鉴定培养上清;纯化得到较高纯度的融合蛋白并经SDS-PAGE鉴定;小鼠辐射实验表明CBLB502-Fc具有抗辐射作用。结论:真核表达并纯化了具有抗辐射作用CBLB502-Fc融合蛋白,为后续研究CBLB502-Fc的生物学功能奠定了重要基础。; 陈柯言殷慧慧靳杨谭招丽高丽华邵勇王友亮胡显文段海峰; 关键词：TOLL样受体5 融合蛋白真核表达抗辐射

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殷慧慧