黄亚杰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国科学院过程工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于中国仓鼠卵巢细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺的优化
- 2017年
- 目的优化基于中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺。方法对于上游细胞培养工艺，先在摇瓶中分别对培养基配比和流加培养方案进行优化，再将优化工艺放大到生物反应器规模并确认其可行性。对于下游蛋白纯化工艺，分别对A蛋白亲和层析的洗脱条件和阴离子交换层析的平衡条件进行优化。结果对于上游细胞培养工艺，以种子培养基：基础培养基（CD OptiCHO）：基础培养基（CDM4Mab）为2：1：1的配比配制培养基，并以3、6和9d补料的流加培养方案进行细胞培养，可获得理想的细胞密度和活率，且成本较低。对于下游蛋白纯化工艺，以pH3．3的洗脱液进行A蛋白亲和层析纯化时，Fc融合蛋白的回收率为94．7G，纯度为98．64％；以pH5．0~pH5．5的平衡液进行阴离子交换层析纯化时，Fc融合蛋白的回收率达到98％以上、纯度达到99％。结论基于CHO细胞表达的Fc融合蛋白制备工艺的上游细胞培养和下游蛋白纯化工艺得到成功优化，这为此类抗体药物制备工艺的优化提供了思路。
- 赵永强苏志国刘永东黄亚杰赵静张纯张耀
- 关键词：重组融合蛋白质类培养基
- 混合培养基模式培养杂交瘤细胞表达单克隆抗体被引量：2
- 2016年
- 采用混合培养基模式将杂交瘤细胞进行减血清悬浮驯化培养,通过优化提高单克隆抗体的表达量,并进行抗体的分离纯化。在杂交瘤细胞悬浮培养优化过程中,最终确定的血清浓度为2%胎牛血清,培养基配比为RPM1640∶SFM4CHO∶Opti CHO(4.5∶4.5∶1),接种密度为3×105cells/m L,采用批次补料流加培养,每2 d流加1次,每次流加量为初始体积的3%,抗体的表达量从原始的84 mg/L提高到168 mg/L。将其进一步在5 L搅拌式生物反应器中进行培养,离心后上清经protein A亲和层析纯化,确定抗体的产量为240 mg/L。
- 黄亚杰朱光凯刘珊赵永强谢波刘道军
- 关键词：单克隆抗体
