王东强
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 长春地区宠物犬贾第虫感染的分子流行病学调查与感染虫株的TPI基因分型
- 2017年
- 贾第虫是一种人兽共患性寄生原虫,可在全世界范围内传播,并且有人—人,人—动物,以及动物特异性的传播循环,且其流行率与地理环境以及不同的区域有关。采用分子生物学分析方法,确定长春地区的宠物犬患有贾第虫的患病率以及基因型来评估犬贾第虫向人传播的危险。调查结果显示:宠物犬的贾第虫流行率为10.46%(25/239)。通过磷酸丙糖异构酶(TPI)基因的多态性对所分离虫株的基因型进行鉴定,结果显示所有贾第虫的基因型均为犬特异性的C型,未发现人兽共患的A型和B型。基因亚型结果显示在所有的样本中以CⅠ为主要亚型,占全部样本的76.00%(19/25)。此结果显示出贾第虫由犬传播给人的风险很低,这与以往来自中国南方的调查结果明显不同。
- 张天宇刘静张夏平王东强邵清延尹继刚
- 关键词：宠物犬贾第虫磷酸丙糖异构酶
- 微小隐孢子虫TSP7蛋白质通过硫化肝素介导子孢子对HCT-8细胞的黏附
- 微小隐孢子虫属于顶复门原虫,是导致人和动物腹泻的主要病原之一。目前对该虫的致病机理尚不清楚。肝素类糖胺聚糖分子是一类重要的黏附受体,其能够显著抑制虫体对宿主细胞的黏附入侵。本研究对微小隐孢子虫TSP7蛋白质作为研究对象,...
- 王东强张天宇高鑫焦新张楠陆慧君朱冠尹继刚
- 关键词：微小隐孢子虫肝素
- 文献传递
- 微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶的定位及活性检测
- 2023年
- 本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征。设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位。通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性。结果显示,成功获得并纯化抗CpGAPDH抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状。利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应。结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 邹贝贝王东强尹继刚朱冠
- 关键词：微小隐孢子虫蛋白定位
- 微小隐孢子虫分泌蛋白cgd2420的鉴定被引量：1
- 2021年
- 目的针对微小隐孢子虫一个含信号肽的功能未知蛋白进行细胞定位等分析,为阐明其功能提供实验依据。方法通过生物信息学分析从隐孢子虫基因组寻找含信号肽蛋白,从中选出cgd2420基因编码的蛋白,以此为对象设计抗原多肽并免疫新西兰家兔,获得多克隆抗体;利用膜亲和层析膜纯化方法纯化抗体,利用免疫荧光(IFA)法和ELISA试验检测该蛋白在子孢子和脱囊阶段的亚细胞定位和分泌情况。结果 IFA显示cgd2420蛋白位于子孢子表膜,并在滑行过程分泌形成轨迹。ELISA结果显示,抗cgd2420抗体在隐孢子虫脱囊后的上清中检测到该蛋白(A405值为0.532),是对照样品未脱囊上清(A405值为0.145)的3.65倍(P<0.01)。结论 cgd2420蛋白是一种位于子孢子表膜的分泌蛋白,在卵囊脱囊阶段及子孢子滑行过程中分泌,这些特征表明该蛋白可能是潜在的分泌抗原,值得进一步探究其在子孢子入侵时期的作用,以及作为检测隐孢子虫感染的候选靶抗原的可行性。
- 焦新尹继刚王东强武晓东张楠朱冠
- 关键词：微小隐孢子虫分泌蛋白多克隆抗体免疫荧光亚细胞定位
- 微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_1430的亚细胞定位及其HCT-8细胞黏附特性研究
- 2019年
- 目的对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_1430进行亚细胞定位,研究其对HCT-8细胞的黏附特性及肝素结合特性,为深入研究微小隐孢子虫的侵入机制提供依据。方法对Cgd7_1430序列进行生物信息学分析,合成特异性多肽并制备抗多肽抗体,通过间接免疫荧光对该蛋白质在子孢子进行亚细胞定位;通过PCR扩增Cgd7_1430全长基因并克隆至PGEX-4T-1载体,用大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白;通过细胞亲和ELISA和流式细胞术确定重组蛋白与HCT-8细胞的黏附特性;通过Pull-down确定重组蛋白的肝素结合特性。结果成功获得抗Cgd7_1430多肽抗体及其重组蛋白质,间接免疫荧光表明该蛋白定位于子孢子表膜,ELISA、流式细胞术表明该重组蛋白能够与HCT-8细胞结合,并呈现剂量依赖性和可饱和性,Pull-down实验表明重组蛋白能够与肝素结合。结论 Cgd7_1430蛋白质是一种子孢子表膜蛋白,能够与HCT-8细胞特异性结合,该蛋白为肝素结合蛋白,可能与宿主细胞表面的硫化肝素受体结合介导虫体的侵入过程。本研究为深入研究隐孢子虫的侵入机制提供依据。
- 王东强张天宇焦新高鑫王洪法尹继刚
- 关键词：微小隐孢子虫肝素
- 微小隐孢子虫TSP3蛋白的定位分析被引量：1
- 2017年
- 通过对微小隐孢子虫TSP3氨基酸序列进行生物信息学分析设计多肽片段,偶联KLH载体蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清效价并利用特异性亲和层析的方法纯化抗体。以该抗体作为一抗,利用Western blot检测虫体天然蛋白质在体内的表达情况,通过间接免疫荧光方法进行亚细胞定位分析。结果表明:制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,亚细胞定位发现其位于子孢子以及裂殖子的顶端。
- 王科杰邵清延张天宇王东强尹继刚
- 关键词：微小隐孢子虫多肽多克隆抗体
- 特异性检测Cryptosporidium parvum和C.hominis活卵囊的qRT-PCR方法的建立和初步应用
- 隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是一种全球性流行的人畜共患肠道寄生虫病,病原包括顶复门下"隐孢子虫属"的所有物种(Cryptosporidium spp.),其中感染人体的主要为C.parvum和C.ho...
- 张纪飞王东强尹继刚朱冠
- 文献传递
