许鹏
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 表达大肠杆菌分子伴侣GroEL、GroES和GrpE载体的构建及其应用被引量：2
- 2012年
- 大肠杆菌(Escherichia coli)共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子。利用粘性末端PCR技术,以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和GrpE的pR-GESP质粒为模板,设计两对引物,通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子,将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和XhoI酶切的pACYCDuet-1质粒,构建的pA-GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性,和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容。SDS-PACE显示含有pA-GESP质粒的大肠杆菌细胞中3个分子伴侣蛋白的表达水平和含有pR-GESP质粒的大肠杆菌细胞没有明显差异,它们对玉米丝氨酸消旋酶的可溶性表达有部分促进作用,但对N端含有组氨酸标签的玉米铁氧还蛋白还原酶的表达没有作用,在三个含有不同抗生素基因的质粒中共表达分子伴侣、5-氨基乙酰丙酸合酶和尿卟啉原Ⅲ甲基化酶,两个酶连续催化的荧光产物在细胞内积累量为562.13±3.17/OD_(600),而没有分子伴侣的积累量为457.66±4.98/OD_(600),表明分子伴侣改善部分蛋白在大肠杆菌的可溶性表达和催化功能。
- 许鹏王蕾蕾程备久范军
- 关键词：分子伴侣大肠杆菌
