朱妍妍
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ,经I-CeuI+I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定。将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达。结果目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(ΔGFP)-IL-32γ正确。酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml。转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达。结论成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础。
- 李松林朱妍妍李霏尹元琴
- 关键词：腺病毒基因治疗
