李锋
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况。方法通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段,经BP重组与LR重组插入到pAD/CMV/V5-DEST,构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体。酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化,测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs,应用Real-time qPCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达。结果核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体,转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48h后实时定量酵素聚合反应技术(Real-time qPCR)测定EPCs中PDGF-C含量明显提高(P<0.05),Wester blotting检测证实在46×103存在特异性条带。结论成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C,体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物,为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础。
- 李锋罗文军唐博陈以宽孙建明付健
- 关键词：CMV内皮祖细胞
- 重组血小板衍生生长因子CC促静脉血栓溶解、机化、再通的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的探讨重组血小板衍生生长因子CC(PDGF-CC)对静脉血栓溶解、机化和再通过程的影响。方法建立大鼠下腔静脉血栓模型,将40只雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D 4组,建模后24hA组大鼠注射生理盐水100μL,B、C、D组大鼠直接静脉腔内注射不同剂量重组PDGF-CC(B组:100ng/100μL,C组:200ng/100μL,D组:500ng/100μL),每组注射量均为100μL。7d后获取下腔静脉血栓标本,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达变化,vWF免疫组织化学染色分辨血栓切片中阳性细胞的类型。图像分析系统采集并分析切片HE染色后静脉管腔面积及血栓面积,计算溶解率。Masson染色评价血栓中胶原纤维和细胞外基质面积,以及新生毛细血管数量,评价血栓机化、再通情况。结果成功建立大鼠下腔静脉血栓模型,PDGF-CC注射后第7天Western blot测定结果表明各组VEGF蛋白均有表达,但C、D组较B组表达明显上调,B组较A组表达明显上调。vWF免疫组织化学染色结果显示阳性细胞类型为血管内皮细胞,证实存在新生血管形成。切片HE染色及Masson染色结果显示C、D组较其他组血栓溶解更加广泛,血栓机化率较其他组显著提高,同时B组血栓溶解再通机化率高于A组。结论重组PDGF-CC可以通过促血管新生途径显著加快静脉血栓溶解、机化和再通过程。
- 李炯杨檬罗文军唐博李锋金真云
- 关键词：静脉血栓机化
