王丹
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：广东药学院生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黄花蒿MCS基因的克隆及其序列分析与原核表达被引量：3
- 2013年
- 目的从黄花蒿中克隆MEP途径关键酶2C-甲基-D-赤藓糖醇-2,4-环焦磷酸合成酶(MCS)基因,进行序列特征分析、原核表达以及组织表达的研究。方法根据黄花蒿MCS(AaMCS)基因EST序列,克隆MCS cDNA及基因组序列。将MCS编码区与表达载体pET-21a(+)重组,构建pET-21a(+)-MCS的原核表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得MCS融合蛋白。半定量RT-PCR检测MCS的组织表达情况。结果 AaMCS cDNA全长994 bp,包含681 bp的开放阅读框,编码226个氨基酸,基因全长2 540 bp,包含3个外显子和2个内含子。构建pET-21a(+)-MCS重组质粒,获得稳定的pET-21a(+)-MCS原核表达体系。AaMCS在根、茎、叶、花中均有表达,其中花中表达量较高,根和茎中表达量低。结论克隆了AaMCS基因,建立pET-21a(+)-MCS稳定的原核表达体系,为研究AaMCS蛋白的活性及其功能奠定了基础。
- 王英贾伟章谭明俊张军王丹刘顺会
- 关键词：黄花蒿基因克隆原核表达
