- NaAsO_(2)染毒HaCaT细胞中丝氨酸合成途径关键酶的表达及其作用
- 2022年
- [背景]丝氨酸合成途径(SSP)关键酶在肿瘤的生长、增殖、侵袭中发挥重要作用,但其在砷致癌中的作用尚不明确。[目的]以人永生化皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)和NaAsO_(2)所致恶性转化HaCaT(T-HaCaT)细胞为研究对象,观察NaAsO_(2)染毒对SSP关键酶[如磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、磷酸丝氨酸转氨酶1(PSAT1)和磷酸丝氨酸磷酸酶(PSPH)]表达及对细胞增殖、迁移能力的影响,探讨SSP关键酶在砷致癌中的作用。[方法](1)取课题组前期构建的T-HaCaT细胞,实验分组为传代对照(0μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、THaCaT(0.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、NCT503(PHGDH抑制剂,25μmol·L^(-1)组、NCT503(25μmol·L^(-1)+T-HaCaT(0.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组。Western blotting法检测传代对照组和T-HaCaT组细胞的SSP关键酶蛋白表达水平,CCK8法和细胞划痕试验分别检测各组细胞的增殖率和迁移率。(2)取生长良好的对数生长期HaCaT细胞,以0、0.625、1.25和2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)染毒细胞0、24、48和72 h,检测细胞增殖率和SSP关键酶的蛋白表达水平。后续实验给予HaCaT细胞25μmol·L^(-1)NCT503预处理6 h后,用2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)继续染毒72 h,实验分组为对照(0μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、染毒(2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组、预处理组(25μmol·L^(-1)NCT503)、预处理(25μmol·L^(-1)NCT503)+染毒(2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2))组,检测各组细胞的增殖率。[结果] T-HaCaT组细胞中PHGDH的蛋白表达水平是传代对照组的1.60倍(P <0.05),其增殖率(177.51%±14.69%)和迁移率(53.85%±0.94%)高于传代对照组[(100.00%±0.00%)、(24.30%±2.26%)](均P <0.05)。NCT503干预后,NCT503+T-Ha CaT组细胞的增殖率(144.97%±8.08%)和迁移率(35.80%±0.99%)较T-HaCaT组细胞降低(均P <0.05)。NaAsO_(2)染毒72 h后HaCaT细胞的增殖率随染毒浓度的增加而增加(r=0.862,P <0.05),与此一致,各染毒组HaCaT细胞中SSP关键酶的蛋白水平均较对照组表达增加(均P <0.05)。2.5μmol·L^(-1)NaAsO_(2)�
- 李凤敏韩进美黄红茜王娜张爱华韩雪
- 关键词：亚砷酸钠HACAT细胞
- 慢性砷暴露致人体生物样品p53、p16启动子区甲基化的改变被引量：3
- 2017年
- [目的]了解砷暴露对人体生物样品中p53、p16启动子区甲基化的影响,探讨p53、p16启动子区DNA甲基化改变及在砷致病中的作用。[方法]于贵州省燃煤污染型地方性砷中毒病区,选择42名常驻居民为暴露组,另于距病区约12 km的非砷暴露村,选择40例居民作为对照组。在知情同意的原则下,采集受试对象尿液、血液和发样,使用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法检测受试对象尿砷和发砷,采用亚硫酸盐修饰后测序法(BSP)法检测p53、p16启动子区Cp G位点甲基化情况。[结果]暴露组尿砷为(40.59±27.12)μg/g、发砷为(0.32±0.36)μg/g,p53平均甲基化率为(8.32±1.51)%,暴露组-71、+42、+109位Cp G位点甲基化率分别为(11.44±3.64)%,(2.58±1.29)%和(4.98±1.33)%,均高于对照组(均P<0.05);暴露组和对照组p16平均甲基化率和各Cp G位点甲基化率差异均无统计学意义(均P>0.05)。[结论]p53基因启动子区Cp G位点的甲基化与砷暴露有关,砷暴露所致的DNA甲基化可能存在位点的特异性。
- 韩雪李军胡丽莎顾先桃魏绍峰黄晓欣张爱华
- 关键词：DNA甲基化P53基因P16基因
- 砷致氧化损伤与p53和p16基因启动子区甲基化的关联研究被引量：2
- 2017年
- 目的探讨砷所致的氧化损伤与其所引起的基因启动子区高甲基化的关联。方法于2013年12月,在贵州省燃煤污染型地方性砷中毒病区招募74名常驻居民为研究对象,检测尿砷、发砷及尿中8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-d G)的水平以及p53、p16启动子区CpG位点甲基化的情况。结果在控制年龄、性别、吸烟、饮酒后,尿砷与尿中8-OH-d G水平间呈正相关(P<0.05)。p16基因启动子区+248位和+317位CpG位点甲基化率与尿砷水平呈正相关(P<0.05),+248、+261、+314、+317、+320、+391位CpG位点甲基化率与尿中8-OH-d G水平呈正相关(P<0.05)。p53基因启动子区-9位、-127位CpG位点甲基化率与尿中8-羟基脱氧鸟苷水平呈正相关关系(P<0.05),+80位CpG位点甲基化率与尿砷水平呈正相关(P<0.05)。结论砷介导的氧化应激与砷所致基因异常甲基化间存在一定关联,其相关机制需进一步探索。
- 韩雪马璐马璐李军黄晓欣
- 关键词：砷8-羟基脱氧鸟苷DNA甲基化
- 亚砷酸钠对HaCaT细胞DNA甲基转移酶的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预效应被引量：1
- 2020年
- [背景]砷暴露可致人皮肤病变,砷所致的DNA甲基化改变是其主要的致病机制之一,但砷如何引起DNA甲基化改变目前尚未明确。[目的]本研究以永生化的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)为研究对象,检测亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对HaCaT细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)m RNA和蛋白表达水平的影响,并探讨砷所致氧化应激与其所致DNMTs mRNA和蛋白表达水平改变之间的关联。[方法]给予HaCaT细胞不同浓度的NaAsO2(0、0.625、1.25、2.50μmol·L^-1)处理,干预组给予10.0μmol·L^-1抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理4 h后加入2.50μmol·L^-1 NaAsO2,染毒时间为72 h。应用免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,生化法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞DNMT1、DNMT3a和DNMT3b mRNA水平,Western blotting法检测DNMTs蛋白水平。[结果]不同浓度NaAsO2处理HaCaT细胞72 h后,HaCaT细胞ROS含量、MDA水平随染毒浓度的增加而升高(F趋势=441.675,P<0.001;F趋势=22.430,P=0.012);1.25、2.50μmol·L^-1浓度组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。随染毒浓度的增加,DNMT1m RNA及蛋白表达水平升高(F趋势=30.280,P=0.001;F趋势=40.421,P<0.001),DNMT3a mRNA及蛋白表达水平降低(F趋势=226.283,P<0.001;F趋势=30.848,P=0.001),DNMT3b蛋白表达水平升高(F趋势=15.095,P=0.005);各染毒组DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。NAC处理后,与2.50μmol·L^-1 NaAsO2单独处理组相比,Ha Ca T细胞ROS含量、MDA水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),DNMT3a m RNA及蛋白水平无明显改变(P>0.05),DNMT3b蛋白水平降低(P<0.05),m RNA水平无明显改变(P>0.05)。[结论]NaAsO2可改变HaCaT细胞DNMTs mRNA及蛋白表达水平,这种变化可能与砷所致的氧化应激有关。
- 韩进美黄红茜李凤敏张爱华韩雪
- 关键词：亚砷酸钠HACAT细胞氧化应激DNA甲基转移酶
- 一种多功能冻存盒
- 本实用新型公开了一种多功能冻存盒，包括中空结构的盒体；所述盒体底部卡接有抗震垫层，所述盒体内竖直设置多个中空且顶部开口的EP管套，所述EP管套顶部贯穿盒体顶面，所述EP管套底部通过固定栓连接于所述抗震垫层上表面；盒体内环...
- 马璐张爱华邹忠兰王大朋陈雄王庆陵韩雪
- 文献传递
