孙长峰
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
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- 杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子。重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5%的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验。结果在本研究中拼接引物经SOE-PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZαA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用。结论杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性。
- 孙长峰仲维霞王洪法崔勇赵桂华
- 关键词：CECROPINP1DERMASEPTIN毕赤酵母分泌表达
- 抗菌肽作用机制及改造策略研究进展被引量：9
- 2013年
- 抗菌肽是生物体先天性免疫系统的重要组成成分,是多种不同具有抗菌活性天然多肽分子的统称。研究发现抗菌肽具有抗包括G+细菌,G-细菌,真菌,支原体,病毒在内的多种病原体的广谱作用活性,有些抗菌肽还具有抗肿瘤活性。本文主要综述了抗菌肽的分类、作用机制、改造策略及其应用中存在的问题。
- 孙长峰仲维霞王洪法
- 关键词：抗菌肽
