安志远
- 作品数：6 被引量：26H指数：4
- 供职机构：首都医科大学附属北京朝阳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 长链非编码RNA对免疫应答调节的研究进展被引量：6
- 2016年
- lncRNA是由RNA聚合酶Ⅱ转录生成,长度大于200个核苷酸的长链非编码RNA,它没有开放读码框,不能翻译成蛋白质,曾被认为是基因组中的＂暗物质＂。目前科学家们还没有精确掌握其功能信息以及全部的二维和三维结构,所以很难对lncRNA进行分类,现在是通过lncRNA和蛋白编码基因的相对位置对其进行分类的。
- 安志远
- 关键词：开放读码框病毒复制转录本宿主免疫干扰素应答固有免疫
- 鲍曼不动杆菌Omp34经线粒体途径诱导HeLa细胞凋亡被引量：4
- 2018年
- [目的]构建鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)外膜蛋白34(outer membrane protein 34,Omp34)的表达载体pcDNA3.1/myc-His-Omp34,研究Omp34引起HeLa细胞凋亡的机制。[方法]PCR扩增目的基因Omp34,将其克隆至载体pcDNA3.1/myc-His;菌液PCR和测序筛选阳性克隆;将pcDNA3.1/myc-His-Omp34转染HeLa细胞;反转录PCR和Western Blot检测Omp34在HeLa细胞中的表达;CCK8实验检测细胞增殖抑制率;JC-1探针检测线粒体跨膜电位;透射电镜观察HeLa细胞线粒体结构,Western Blot鉴定HeLa细胞线粒体凋亡相关蛋白。[结果]成功构建pcDNA3.1/myc-His-Omp34真核表达载体;并且Omp34可抑制HeLa细胞增殖,引起线粒体损伤及跨膜电位崩溃,导致促凋亡蛋白Bax和Bad表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL表达降低。[结论]成功构建pcDNA3.1/mycHis-Omp34表达载体,并证明Omp34可经线粒体途径导致HeLa细胞凋亡。
- 安志远丁文一
- 关键词：鲍曼不动杆菌HELA细胞系线粒体细胞凋亡
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬被引量：5
- 2018年
- 目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测Omp A对RAW264. 7细胞自噬的影响。结果:Omp A可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高Omp A引起的LC3B-II表达升高。结论:鲍曼不动杆菌Omp A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264. 7细胞自噬。这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据。
- 安志远丁文一郑春明黄骁舾
- 关键词：鲍曼不动杆菌外膜蛋白ARAW264.7细胞自噬
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A慢病毒载体的构建及其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活被引量：7
- 2019年
- 目的建立OmpA过表达慢病毒载体并观察其对RAW264.7细胞NLRP3炎症小体的激活。方法以鲍曼不动杆菌ATCC 19606为模板,设计引物扩增OmpA基因,将其克隆至慢病毒表达载体pCDH-MSCV-copGFP中。将此表达质粒和辅助质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,浓缩病毒上清液并用GFP报告基因法测定病毒滴度;用包装病毒颗粒感染RAW264.7细胞48h,Real-time PCR法检测OmpA的mRNA表达水平,用Western blot法检测OmpA蛋白以及感染后NLRP3炎症小体相关蛋白。结果成功构建OmpA过表达慢病毒载体并在HEK293T细胞中包装得到病毒,经测定病毒滴毒为1.5×109 TU/mL;重组OmpA病毒感染RAW264.7细胞表达OmpA蛋白,该蛋白能引起NLRP3炎症小体激活。结论成功构建OmpA过表达慢病毒载体并证明OmpA可激活RAW264.7细胞NLRP3炎症小体。
- 安志远丁文一
- 关键词：鲍曼不动杆菌外膜蛋白ARAW264.7细胞
- 鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞与YY1互作的差异蛋白鉴定
- 2023年
- [目的]鉴定鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞前后与YY1互作的差异蛋白。[方法]用脂质体转染法在HeLa细胞中过表达YY1;之后用Co-IP技术捕获与YY1相互作用的蛋白质;最后利用高效液相色谱质谱联用技术鉴定互作差异蛋白。用GO注释和KEGG分析预测蛋白质的功能。[结果]经Co-IP和蛋白银染发现鲍曼不动杆菌感染组和YY1捕获组与IgG组比较在45~55 kDa和70~100 kDa处有明显的差异条带;质谱结果显示YY1捕获组的特有蛋白有81个,GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核及核膜,具有RNA结合功能,主要参与了RNA剪切的生物学过程;与IgG组和YY1捕获组比较在鲍曼不动杆菌感染组中获得了SFRS4、CPSF2、LUC7L2和U2AF65这些差异蛋白。GO注释和KEGG分析表明这些差异蛋白定位于细胞核散斑,具有RNA结合功能,主要参与了mRNA剪切和核输出的生物学过程。[结论]鲍曼不动杆菌感染的HeLa细胞中与YY1作用的蛋白均参与了RNA剪切过程,提示鲍曼不动杆菌很可能利用这些蛋白来调节YY1,为进一步研究鲍曼不动杆菌与YY1的相互作用机制奠定了基础。
- 丁文一安志远
- 关键词：鲍曼不动杆菌HELA细胞
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A真核表达载体构建及其诱导Hela细胞不完全自噬被引量：6
- 2017年
- 目的构建鲍曼不动杆菌ATCC19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)的真核表达载体pEGFP-OmpA,研究OmpA对Hela细胞自噬的影响。方法采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606的OmpA基因,将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1,以构建重组质粒pEGFP-OmpA;用脂质体转染法将其转染Hela细胞;流式细胞术、细胞免疫荧光和Western blot检测OmpA表达水平;激光共聚焦显微镜检测OmpA在Hela细胞中的定位;Western blot及透射电子显微镜检测OmpA对Hela细胞自噬的影响。结果经双酶切及测序鉴定表明pEGFP-OmpA质粒构建成功;OmpA可以大量表达于Hela细胞的细胞质和细胞核中;OmpA可导致Hela细胞中自噬相关蛋白LC3BⅡ、p62和Beclin-1表达升高,而且在Hela细胞中发现自噬小体;OmpA会干扰p62降解,引发不完全自噬。结论本研究成功构建pEGFP-OmpA真核表达载体,它可以在Hela细胞中高效表达,并可导致Hela细胞不完全自噬,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌OmpA引起自噬的机制奠定基础。
- 安志远黄骁舾丁文一
- 关键词：鲍曼不动杆菌外膜蛋白AHELA细胞系
