张玲
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：杭州师范大学医学院更多>>
- 发文基金：浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目浙江省自然科学基金更多>>
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- 猫α-synuclein蛋白的表达纯化及生物学特征分析
- 2015年
- 目的对猫突触核蛋白（α-synuclein）进行克隆、表达及纯化,并探讨其生物信息学特征。方法在Genebank中α-synuclein基因的保守区域内设计引物,从猫脑c DNA文库中PCR扩增得到猫的α-synuclein基因,再将此基因双酶切后克隆到p ET28a原核表达载体中,构建重组质粒,测序正确的重组质粒转化BL21（DE3）大肠杆菌,采用IPTG诱导表达。然后对猫α-synuclein氨基酸的同源性和疏水性进行分析。结果实验成功从猫脑c DNA文库中扩增出α-synuclein基因,基因全长381个碱基,编码126个氨基酸。获得的全长基因成功克隆进入p ET28a,最后转染大肠杆菌BL21（DE3）,获得可溶性表达的α-synuclein蛋白质,蛋白质分子量为13.12k D,与预期分子量一致。生物信息学分析显示猫α-synuclein蛋白与人源及鼠源α-synuclein氨基酸具有很高的同源性,分别为87.35%和83.15%,但是与鼠和人的氨基酸序列比较,猫α-synuclein氨基酸缺失41～54位氨基酸。蛋白质结构预测显示猫α-synuclein具有很好的疏水性,有助于诱导表达时形成可溶性蛋白,这一结果在本研究中得到证实。结论本研究首次克隆了猫α-synuclein基因,并在大肠杆菌中实施了可溶性表达,为后期研究α-synuclein的进化、蛋白晶体结构、生物学功能和帕金森动物模型的构建奠定了一定的基础。
- 倪斌张玲李坚张金喜周健杨可威张君智戴一鸣夏雅琴鲁燕华刘俊平李建峰
- 关键词：Α-突触核蛋白帕金森病克隆原核表达纯化
