张立
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：四川师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 甘薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(CPI)克隆及功能初步分析
- 2018年
- 半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitor,CPI)是一类广泛存在于动植物体内的蛋白质超家族,它可以与巯基蛋白水解酶形成动态平衡,参与细胞内的多种生命活动,对植物的生长发育和逆境生长具有重要的意义。为了研究甘薯CPI基因的功能,本研究以徐薯18为研究材料,利用甘薯转录组数据库中的注释信息,通过RT-PCR扩增得到全长CPI基因,并对其进行了生物信息学分析。将甘薯CPI基因插入到原核表达载体pET-32a(+)中,并将其转入到大肠杆菌BL21,然后在高温、PEG6000等胁迫培养基中培养,发现含有CPI基因的重组菌株在干旱和高温的环境下胁迫能力有所增加。这表明CPI基因在甘薯抗逆过程中可能起到了一定的作用,为未来进一步研究甘薯CPI基因的功能以及利用遗传工程技术提升甘薯抗逆作用打下了基础。
- 洪子茜杨秋萍侯馨怡邓鸽张立费雪婷胡又文雍彬邵欢欢
- 关键词：徐薯18胁迫蛋白相互作用
- 人胰岛素原基因在大肠杆菌中的可溶性表达及分离纯化研究被引量：1
- 2016年
- 根据NCBI中的人胰岛素原基因序列及大肠杆菌密码子偏爱性设计特异引物,PCR扩增得到人胰岛素原基因,构建该基因的原核表达质粒p ET32-PI,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。对重组菌进行温度和IPTG浓度优化,发现重组菌在30℃和终浓度为0.6 mmol/L的IPTG条件下表达效果最好且没有包涵体,经SDS-PAGE和Westem blot检测,表达蛋白的相对分子质量与理论相对分子质量一致且具有胰岛素的免疫原性,证明胰岛素原基因得到了正确表达。对重组菌进行流加发酵,发酵液离心收集菌体,破菌后上清液过亲和层析柱和离子交换柱分离纯化目的蛋白,透析后的样品用肠激酶和羧肽酶酶切,利用亲和柱去除融合蛋白与His标签,最终分离胰岛素样品,利用免疫酶标法,l m L样品测得活性92μIU,证明实验所得样品具有人胰岛素活性。
- 沈加斌徐攀李鑫雨张立郑海燕雍彬
- 关键词：人胰岛素原大肠杆菌发酵分离纯化
