王立霞
- 作品数：18 被引量：26H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- RNaseⅢ RncS对单核细胞增生李斯特菌毒力的调控作用研究被引量：2
- 2020年
- 核糖核酸酶RnaseⅢ是一种调控nc RNA水平的重要酶系。为了解核糖核酸酶RnaseⅢRncS在单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力中的调控作用,本研究在构建LM-ΔrncS基因缺失突变株的基础上,通过动物感染试验检测强毒株LM-SB5与缺失株LM-Δrnc S对昆明系小鼠的LD50、存活能力、脏器载菌量及病理组织学产生的影响;利用细胞侵染试验检测强毒株与缺失株对小鼠巨噬细胞RAW264.7的粘附率、侵袭率及其在胞内生存繁殖能力的影响,分析RnaseⅢRncS对LM毒力的影响。结果显示,LM-SB5强毒株和LM-Δrnc S缺失株对昆明系小鼠的LD50分别为105.60 CFU、106.90 CFU;与LM-SB5强毒株相比,LM-Δrnc S的LD50升高了1.30个对数数量级,小鼠的存活时间明显延长,表明毒力显著降低;第3~5 d肝脏、脾脏载菌量显著减少(P<0.05),其中第4 d差异极显著(P<0.01);LM-Δrnc S缺失株对肝脏、脾脏、肾脏的病理损伤降低;LM-Δrnc S缺失株对RAW264.7细胞的粘附率和侵袭率均显著低于LM-SB5强毒株(P<0.01),在2~6 h之间,LM-Δrnc S缺失株在细胞内的细菌量显著低于LM-SB5强毒株(P<0.05),证实LM-Δrnc S在细胞内的生存增殖能力显著降低,提示rnc S基因对LM毒力发挥有一定的调控作用。本研究为进一步揭示RnaseⅢ在LM毒力中的分子调控机制提供了科学依据。
- 王立霞孟庆玲乔军蔡扩军王登峰郭晶伍晔晖才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌毒力
- 新疆石河子地区犬源立克次体病流行病学调查被引量：2
- 2018年
- 立克次体目(Rickettsiales)中的立克次体属、埃立克体属和无形体属细菌分别能引起立克次体病、埃立克体病和无形体病,硬蜱是其主要传播媒介。在石河子市部分宠物医院及周边地区采集犬血及犬体表寄生蜱,通过PCR技术扩增蜱传立克次体目细菌16S rRNA基因,对所得结果进行测序并做系统进化分析。结果表明,扩增出立克次体345bp特异片段,无形体及犬埃立克体452bp特异片段,测序结果证实这些片段分别为立克次体、无形体和犬埃立克体。遗传进化分析显示,犬源立克次体、埃立克体及无形体石河子流行株分别与Rickettsiales bacterium(EF687768)、Ehrlichia sp.Yonaguni206(HQ697589.1)、Anaplasma(KJ410247.1、KJ410248.1、KJ410249.1)处于同一分支,分别属于立克次体、埃立克体、无形体的保守分支,提示与这些国内外流行株具有较近的亲缘关系。本研究基本理清了石河子地区犬中蜱传立克次体的感染和流行情况,为立克次体的防治提供了流行病学资料。
- 李重阳孟庆玲乔军伍晔晖王立霞郭晶马帅才学鹏
- 关键词：立克次体无形体
- sRNA STnc290对鼠伤寒沙门菌侵染细胞及致病力的影响
- 2022年
- 【目的】鼠伤寒沙门菌(STM)是一种可感染人和多种动物的重要人兽共患病原菌,故有必要研究STM小RNA(sRNA)STnc290基因的分子特征和在细菌的细胞侵染及小鼠致病性中的作用。【方法】通过PCR扩增STM sRNA STnc290基因,并利用生物信息学软件分析STnc290基因的序列特征、二级结构分子特征及预测潜在靶基因。同时,利用λ-Red同源重组系统构建STnc290基因缺失株及回补株;通过分析STM-SL1344、STM-ΔSTnc290及ΔSTnc290/STnc290在侵染细胞、小鼠半数致死剂量、小鼠存活率、致病小鼠肝脾载菌量和小鼠肝脾病理变化差异,利用qRT-PCR检测STnc290基因调控的潜在靶基因转录水平。【结果】sRNA STnc290基因大小为79 bp,其上游序列含有-10 box和-35 box的启动子核心序列TGATATATA和CTGACA,并且还存在σ因子rpoD16结合位点AAATAATT;STnc290基因的二级结构含有典型的茎环结构;通过在线软件预测发现STnc290基因2个潜在的靶基因为pqaA和narX基因。STM-SL1344、STM-ΔSTnc290及ΔSTnc290/STnc290菌株生长测定显示,与STM-SL1344和ΔSTnc290/STnc290回补株相比,STnc290基因缺失株在生长特性上无明显差异(P>0.05);与STM-SL1344株相比,STM-ΔSTnc290对小鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭能力均显著减弱(P<0.05);STM-ΔSTnc290株感染小鼠半数致死剂量显著升高(P<0.05);STM-ΔSTnc290株感染的小鼠存活率显著高于亲本株(P<0.05);STM-ΔSTnc290株感染小鼠肝脾载菌量在感染后第7、9天显著降低(P<0.05)。qRT-PCR检测表明,STnc290基因缺失株靶基因pqaA和narX转录水平均显著下调(P<0.05)。【结论】sRNA STnc290对STM侵染细胞及小鼠致病性具有重要的调控作用。
- 宁程程李娜郭蕴季春辉王立霞李志远乔军孟庆玲才学鹏
- 关键词：鼠伤寒沙门菌侵染细胞
- 黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果的研究被引量：5
- 2016年
- 【目的】探究黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌抑菌效果。【方法】用浓度为1×108CFU/m L的粪肠球菌菌液与麸皮混合饲喂诱导黄粉虫幼虫,在24 h后提取黄粉虫抗菌肽,用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定黄粉虫抗菌肽粗提液浓度,采用试管稀释法测定青霉素、庆大霉素对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC),用多步诱导法筛选出青霉素和庆大霉素耐药的粪肠球菌,用Kirby Bauer法测定黄粉虫抗菌肽对耐青霉素和庆大霉素的粪肠球菌的抑菌活性。【结果】经粪肠球菌诱导24 h后提取的黄粉虫抗菌肽浓度,显著高于未用粪肠球菌诱导的对照组(P<0.05),其抑菌活性也显著高于对照组(P<0.05),并且诱导黄粉虫抗菌肽组对耐青霉素、庆大霉素粪肠球菌的抑菌效果显著高于抗生素组(P<0.05)。【结论】黄粉虫抗菌肽对耐药粪肠球菌具有显著的抑菌效果。
- 何晓辉王立霞方琴王俊刚申红
- 关键词：黄粉虫粪肠球菌抗菌肽耐药菌抑菌
- lmo2672基因缺失对LM在不同环境下生物被膜形成的影响
- 2020年
- 旨在了解AraC家族转录调控因子lmo2672对单核增生李斯特菌(LM)生物被膜(BF)形成的影响。根据同源重组技术构建LM-△lmo2672基因缺失株,利用结晶紫染色法比较LM EGD-e和LM-△lmo2672在不同温度、渗透压、H 2O 2和胆酸盐环境中BF形成量的差异;通过qRT-PCR分析上述不同应激环境中BF相关基因相对转录水平的变化。研究结果证实:与LM EGD-e相比,LM-△lmo2672在4℃,30℃,5%NaCl,8%NaCl,5 mmol/L H 2O 2和0.3%胆酸盐培养环境中BF形成量显著降低;在37℃LM-△lmo2672 BF形成能力极显著降低;在不同应激环境中,LM-△lmo2672 BF形成相关基因的表达量均出现不同程度下降。研究结果表明,lmo2672基因在LM BF形成过程中发挥重要作用。
- 李杰孟庆玲乔军伍晔晖王熙凤王立霞才学鹏
- 关键词：生物被膜
- 核糖核酸酶RnaseⅢrncS基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境应激和生物被膜的调控作用研究
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种胞内寄生的革兰氏阳性人畜共患致病菌,可引起人和多种动物的李斯特菌病。作为一种重要的食源性病原菌,LM主要通过污染的动物源性食品经消化道感染,...
- 王立霞孟庆玲乔军蔡扩军王登峰才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌环境应激
- 文献传递
- 核糖核酸酶RnaseⅢ rncS基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境应激的调控作用研究
- 2018年
- 目的了解核糖核酸酶RnaseⅢrncS基因缺失对单核细胞增生李斯特菌(LM)环境应激和生物被膜形成的影响。方法以LM SB5强毒株为对象,利用温度敏感型穿梭质粒pKSV7,通过基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)和同源重组技术构建LM-ΔrncS基因缺失突变株,检测其在不同温度、pH、高盐、乙醇、H2O2胁迫环境下的适应能力,通过结晶紫染色法检测生物被膜的形成能力。结果与LM-SB5株相比,构建的LM-ΔrncS在37℃、pH 4及pH 7的环境适应能力无显著变化(P>0.05),而在30℃、42℃、pH 9、5%NaCl、3.8%乙醇、0.1%H2O2的应激环境下其适应能力及生物被膜的形成能力显著降低(P<0.05),提示RnaseⅢRncS参与了LM对低温、高温、碱、高盐、乙醇及H2O2胁迫环境的适应过程及生物被膜形成的调控。结论构建的LM-ΔrncS基因缺失突变株,在不同应激环境下的适应能力及生物被膜形成能力均显著降低,为RnaseⅢRncS参与LM ncRNA调控环境应激的分子机制研究奠定了基础。
- 王立霞孟庆玲乔军蔡扩军王登峰伍晔晖王熙凤郭晶才学鹏
- 关键词：单增李斯特菌环境应激
- 非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究被引量：5
- 2019年
- 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。
- 郭晶李重阳孟庆玲乔军伍晔晖王立霞马帅才学鹏
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达
- 单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响被引量：1
- 2019年
- 为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响。结构域分析结果显示,LM-Rnase Ⅲ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应。体外酶活实验表明,Rnase Ⅲ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS的降解活性有所降低(P<0.001);第122位谷氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS降解活性极显著下降(P<0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM Rnase Ⅲ RncS酶活性的关键位点。
- 王立霞孟庆玲乔军蔡扩军王登峰伍晔晖郭晶才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌降解活性
- sRNA rli106在单核细胞增生李斯特菌环境应激及生物被膜形成中的调控作用研究被引量：3
- 2022年
- 单核细胞增生李斯特菌(LM)是一种重要的食源性病原菌,可适应不同的应激环境。为探究LM sRNA rli106基因的生物学功能,本研究以LM EGD-e为亲本株,通过PCR方法扩增sRNA rli106基因,并分析其分子特征;利用同源重组技术构建了LM-Δrli106基因缺失株和CLM-Δrli106基因回补株,分析比较LM EGD-e、LM-Δrli106、CLM-Δrli106在不同应激环境中的适应能力、运动性以及生物被膜(BF)形成能力,并通过qRT-PCR检测BF生成相关基因gltB和gltC的相对转录水平。结果显示,sRNA rli106基因大小为225 bp,上游序列含有-10 box和-35 box启动子核心区域,有转录调节因子CpxR的结合位点。与LM EGD-e、CLM-Δrli106相比,LM-Δrli106在42℃、5%NaCl、8%NaCl、5 mmol/L H2O2的环境应激下的适应性显著减弱,运动性无明显差异,在不同时间段的BF形成能力显著降低。qRT-PCR检测结果显示,LM-Δrli106中gltB和gltC基因的相对转录水平均有所降低。本研究结果首次表明,rli106基因在环境适应性和BF形成中发挥重要的调控作用,但不参与细菌运动性,为揭示rli106基因在LM环境适应性和BF形成中的分子调控机制奠定基础。
- 郭蕴季春辉王立霞宁程程李娜孟庆玲乔军才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌环境适应性生物被膜
