訾亮
- 作品数：2 被引量：9H指数：1
- 供职机构：海南大学农学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 拟南芥NiNJA基因酵母双杂诱饵载体构建及互作蛋白的筛选被引量：9
- 2013年
- JAZ蛋白是植物茉莉酸信号途径的重要负调控因子,JAZ与NiNJA形成蛋白复合体抑制茉莉酸下游转录因子的转录活性,NiNJA蛋白是联系JAZ蛋白与下游转录因子的重要因子。为了研究NiNJA调控的下游基因,首先构建了NiNJA基因的诱饵载体pGBKT7-NiNJA,然后转化酵母Y2HGold感受态,通过自转录激活实验,发现诱饵载体pGBKT7-NiNJA没有自转录激活活性。在此基础上,从拟南芥"Mate&PlateTM"Library进行酵母双杂筛选,获得若干个与NiNJA互作的蛋白,为下一步鉴定NiNJA的互作蛋白及茉莉酸的信号调控途径打下基础。
- 訾亮洪灏翟金玲马穗黄惜
- 拟南芥AtGRP7基因诱饵载体的构建及酵母双杂的初筛被引量：1
- 2012年
- AtGRP7基因是拟南芥的一个从动振荡器基因,目前其生理功能知之甚少。为了更好地研究与AtGRP7基因的互作蛋白,笔者利用PCR技术从携带AtGRP7基因序列的质粒中扩增该基因的编码序列,然后将目标序列插入pGBKT7载体的NcoⅠ和PstⅠ2个酶切位点之间,构成酵母双杂体系的诱饵载体。酶切和测序结果表明,构建的载体目标基因序列和阅读框是正确的。之后,将该载体转入感受态酵母Y2HGold菌株中,并检测其表达物对报告基因的激活情况。AtGRP7酵母转化菌在SD/-Trp平板上长势良好;在SD/-Trp/-Ade平板上长势较弱;在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade/-His平板上则没有生长。这说明His合成相关基因没有被转录和翻译,AtGRP7基因在该酵母双杂体系中没有自转录激活。笔者在酵母双杂的初步筛选中,还获得几个可能与AtGRP7互作的基因。
- 刘长仁刘长仁刘伟刘伟翟金玲
- 关键词：诱饵载体
