陈学勤
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：复旦大学上海医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 衣原体主要外膜蛋白的研究进展被引量：3
- 2006年
- 衣原体感染与多种慢性疾病密切相关,其主要外膜蛋白(MOMP)是一种多功能蛋白,分别与外膜结构的稳定性、生长代谢调节、抗原性和毒力密切相关。随着沙眼衣原体和肺炎衣原体基因组测序的完成,人们得以揭示其重要的生物合成、代谢途径,确定调控机制及其与致病的相关性。利用分子生物学技术在分子水平分析衣原体主要外膜蛋白的结构、抗原表位,对于免疫防御、免疫病理和免疫诊断均有重要意义。本文综述了衣原体主要外膜蛋白的分子结构、基因特性、抗原表位与应用前景。
- 陈学勤钱利生
- 关键词：衣原体主要外膜蛋白
- 肺炎衣原体主要外膜蛋白重组抗原制备与应用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:为了研究肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,Cpn)抗原作为特异性诊断试剂,本文应用重组技术研制Cpn主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)重组抗原,用于血清IgG抗体的检测。方法:通过构建和表达CpnMOMP重组抗原,应用包涵体纯化法纯化重组抗原后建立ELISA试验,并检测了82份正常人血清及临床标本207份,其中心血管疾病血清118份,呼吸系统疾病血清59份,其他疾病30份。结果:应用克隆技术,获得纯化的Cpn MOMP重组抗原。用重组抗原检测血清IgG,正常人血清阳性检出率仅为3.7%;而207份病人血清,116份为阳性,总阳性率56.0%。其中心血管疾病血清118份,阳性69份,阳性率58.5%;呼吸系统疾病血清59份,阳性38份,阳性率64.4%;其他疾病患者30份,阳性9份,阳性率仅30.0%。结论:与进口ELISA试剂盒相比阳性率基本相符,统计分析无显著意义,但重组MOMP蛋白的抗原特异性较高,且具有抗原制备较为方便和价廉等特点。由于临床标本数量有限,尚需进一步探索MOMP重组抗原作为Cpn感染疾病的辅助诊断。
- 陈学勤陈圆圆李雪萍钱利生
- 关键词：肺炎衣原体ELISA
- 制备肺炎衣原体抗原片检测血清抗体被引量：2
- 2006年
- 目的:探索肺炎衣原体抗原片检测血清抗体法在诊断Cpn感染中的实际应用前景。方法:应用进口肺炎衣原体(Cpn)毒株感染Hep-2细胞,分别以瑞氏-姬母萨染色、吖啶橙染色和直接免疫荧光染色等3种方法鉴定Cpn感染细胞。纯化获取大量Cpn抗原,用于制备斑点抗原片。建立微量免疫荧光染色法(MIF)检测血清抗体,诊断Cpn感染。结果:Cpn感染Hep-2细胞的最适条件是用含1μg/mL放线菌酮的维持液,在35℃、5%CO2孵箱中培养7d,并在培养的第0、3、4、5天以2600r/min离心1h,感染成功率极高。染色反应显示,瑞氏-姬母萨染色可将Cpn包涵体染成蓝紫色或红紫色;吖啶橙染色则使Cpn感染的Hep-2细胞呈现鲜明的橘红色;免疫荧光抗体染色后,在Cpn感染细胞内可见亮苹果绿色包涵体。通过斑点抗原荧光抗体染色的方法抽样检测了100份病人血清中的Cpn抗体,其中抗Cpn-IgG抗体的阳性血清共61份,阳性率为61%。与Cpn-外周血单核细胞(Cpn-PBMC)抗原片比较,阳性检出率无明显差别。结论:用Cpn感染细胞制作的Cpn斑点抗原片可用于临床检测血清Cpn-IgG抗体,且具有特异性、敏感性高的特点,但要求检测人员有一定的经验。
- 陈学勤陈园园李雪萍王卫群余竹元钱利生
- 关键词：肺炎衣原体微量免疫荧光法
- 肺炎嗜衣原体菌体抗原的制备及应用
- 2009年
- 目的制备肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)菌体抗原,纯化后建立ELISA方法,用于血清Cpn抗体的检测。方法应用进口Cpn毒株感染Hep-2细胞,利用吖啶橙染色和直接免疫荧光染色判断Cpn感染细胞,制备Cpn抗原。用初步纯化的Cpn抗原建立ELISA方法检测人血清特异性抗体。结果吖啶橙染色和直接免疫荧光检测显示,Cpn成功感染Hep-2细胞。提取Cpn抗原,用ELISA检测84份病人血清特异抗体,阳性率为52.4%,ELISA试剂盒法的阳性率为51.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。用Cpn菌体抗原ELISA检测209份病人血清,阳性率59.3%(其中心血管疾病患者血清138份,阳性率58.0%;呼吸系统疾病患者血清71份,阳性率62.0%);检测84份健康者血清,阳性率2.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cpn菌体抗原ELISA检测血清抗Cpn抗体可用于判断Cpn感染;病人血清Cpn抗体阳性表明,某些心血管和呼吸系统疾病患者的致病原因可能与肺炎嗜衣原体感染有关。
- 李雪萍陈学勤钱利生
- 关键词：肺炎嗜衣原体吖啶橙染色
- 肺炎衣原体单克隆抗体的研制和应用被引量：3
- 2006年
- 目的:以杂交瘤技术制备抗肺炎衣原体(Cpn)单克隆抗体,用于衣原体感染的诊断及相关疾病的研究。方法:以进口Cpn抗原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞。收集接种过杂交瘤细胞的小鼠腹水,分别用ELISA法检测抗体效价、用免疫琼脂扩散试验鉴定单抗的类别、用微量荧光免疫试验(MIF)检测单抗的种属特异性。用克隆表达的主要外膜蛋白(MOMP)通过Dot-ELISA法分析单抗的特异性。通过建立直接免疫荧光法(DIF)检测病人和正常人外周血单核细胞(PBMC)标本,并进行统计处理。结果:小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞的融合率为61.46%(236/384),最终获得4株稳定分泌Cpn单抗的细胞株。用ELISA法检测小鼠腹水,效价高者可达1∶100000。免疫琼脂扩散试验鉴定为IgG类单抗,扩散效价达1∶128。自制单抗能与重组MOMP发生结合反应,表明其为抗CpnMOMP抗体。自制单抗与进口单抗类似,即与鹦鹉热衣原体(Cps)出现一定程度的交叉反应,而与沙眼衣原体(Ct)则无交叉反应。对240份PBMC标本用自制单抗和进口单抗同时检测Cpn抗原,2种单抗检测均阳性的共86份,经SPSS软件分析两者具有较好的一致性。DIF检测显示,心血管疾病和呼吸道疾病Cpn抗原阳性检出率分别为69.34%(95/137)和72.06%(49/68),与正常人标本Cpn抗原阳性率相比,均具有显著性差异。结论:获得IgG类抗CpnMOMP单抗,自制Cpn单抗的特异性和敏感性均与进口单抗具有较好的一致性。PBMCCpn抗原检测的统计分析证实,对于动脉粥样硬化等某些疾病的发生和发展,Cpn感染可能是重要的原因之一,但其中的因果关系还有待深入研究。
- 陈园园王卫群陈学勤李雪萍钱利生
- 关键词：免疫荧光试验外周血单核细胞
