孟大伟
- 作品数：13 被引量：26H指数：4
- 供职机构：吉林师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金吉林省教育厅科研项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 拟南芥中病毒抑制子HC-Pro介导的DNA去甲基化
- 2019年
- 植物中RNA介导的胞嘧啶甲基化(RdDM)在调节基因表达、调控转座子的活动和防御病毒等方面发挥重要作用。水杨酸(salicylic acid, SA)是一个重要的信号分子,能够诱导抗性基因的表达。SA途径能被RNA病毒激活,但其分子机制并不清楚。本研究中,我们证明了由RNA病毒编码的HC-Pro蛋白(Hepercomponent protease)在SA途径ACD6启动子区的DNA去甲基化过程中起作用。植物中HC-Pro的过表达增加了SA途径防御基因ACD6和PR5的表达。研究结果揭示了在HC-Pro转基因拟南芥中HC-Pro干扰DNA甲基化并激活SA途径,并阐明了RNA病毒激活SA途径的分子机制,为研究植物病毒与宿主互作的分子机制提供了研究依据。
- 杨丽萍孟大伟王悦许亚男金太成
- 植物瞬时表达体系真空侵染法的优化被引量：1
- 2020年
- 病毒能够激活宿主的防御途径,诱导宿主大量基因表达。辅助成分-蛋白酶(helper-component protease, HC-Pro)是RNA病毒编码的基因沉默抑制子,关于HC-Pro诱导植物内源基因表达的分子机制并不十分清楚。本研究利用农杆菌介导的真空侵染法在拟南芥(Arabidopsis thaliana)小苗中瞬时表达了外源基因HC-Pro,并对影响基因表达效率的真空侵染条件进行了优化。结果表明农杆菌重悬液浓度OD600=1.5,真空压力为0.08 MPa,HC-Pro基因表达效率最高(95%)。半定量RT-PCR检测结果表明在真空侵染14 d后,HC-Pro在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中得到了瞬时表达。通过优化了农杆菌介导的真空侵染法,外源基因快速、高效在拟南芥中得到了表达。本研究结果为研究病毒抑制子HC-Pro的功能提供了帮助。
- 王悦吴艳菊孟大伟郎晨婧赖薪宇刘佳葛禹凡杨丽萍
- 非生物胁迫激活ABA途径ACO3基因的表达被引量：3
- 2020年
- DNA甲基化在植物生长发育和应答非生物胁迫过程中起重要作用。本研究揭示了ABA途径相关基因ACO3应答非生物胁迫的分子机制。定量PCR (quantitative PCR, qPCR)的检测结果表明用野生型拟南芥(Col-0)作对照,被干旱、低温和盐处理的拟南芥植物中ACO3基因表达水平显著增加。重亚硫酸盐测序的数据分析表明非生物胁迫能够诱导ACO3启动子DNA去甲基化并激活该基因的表达。RNA介导的DNA甲基化(RNA directed DNA methylation, RdDM)途径突变体ago4和dcl3中ACO3基因表达水平明显增加,暗示RdDM途径在调控ACO3基因应答非生物胁迫过程中起重要作用。
- 金太成郎晨婧孟大伟王悦吴艳菊杨丽萍
- 关键词：非生物胁迫拟南芥
- 苜蓿次生胚遗传转化系统优化被引量：4
- 2019年
- 稳定高效的遗传转化系统是对苜蓿进行基因改良的重要前提条件。本实验以吉林省适产苜蓿品种为实验材料,对农杆菌介导的次生胚遗传转化系统中的各种关键影响因素进行了优化:胚性愈伤诱导培养基中2,4-D和KT的最适浓度分别为2 mg/L和0.5 mg/L;体胚分化培养基中6-BA和NAA的最适浓度均为0.5 mg/L;该法最适受体基因型为公农系列苜蓿品种;遗传转化过程中,胚性愈伤诱导培养基及体胚分化培养基中添加的卡那霉素浓度分别为75 mg/L和50 mg/L。通过GUS基因表达检测和定量RT-PCR分析表明,外源基因已经顺利整合进苜蓿基因组染色体中,遗传转化效率为20%左右。本实验为培育吉林省转基因苜蓿新品种工作提供了科学依据。
- 金太成王悦吴艳菊孟大伟杨丽萍
- 关键词：SATIVA
- 利用叶片真空侵染法表达外源蛋白GFP被引量：3
- 2015年
- 植物瞬时表达系统已经成为近些年来国内外的研究热点之一,该表达系统主要的侵染技术为叶片注射法和真空侵染法。本研究成功构建了植物瞬时表达载体p35S-30B-GFP,并利用叶片真空侵染技术在烟草中表达外源基因GFP的研究,RT-PCR检测结果说明我们成功地表达了外源基因GFP。研究中对植物瞬时表达体系进行了优化试验,为植物中进行外源蛋白的快速表达奠定了研究基础。
- 金太成孟大伟刘璐廖艺红张爽罗佳尧杨丽萍
- 关键词：烟草烟草花叶病毒绿色荧光蛋白
- 干旱诱导AtGSTF14基因DNA去甲基化被引量：1
- 2020年
- DNA甲基化在调控植物基因表达方面起重要作用。干旱、低温和盐胁迫严重地影响了植物的生长发育。然而,DNA甲基化是否在干旱诱导的AtGSTF14基因表达过程中起作用还不清楚。本研究揭示了干旱诱导AtGSTF14基因启动子重复序列的DNA去甲基化,并激活了AtGSTF14基因的表达。本研究采用实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测目的基因的表达,结果表明干旱处理的拟南芥植物中AtGSTF14基因表达水平显著增加,野生型拟南芥(Col-0)被作为对照。亚硫酸盐测序分析表明与野生型拟南芥中AtGSTF14基因DNA甲基化水平相比,干旱处理的拟南芥植物中AtGSTF14启动子区重复序列的DNA甲基化水平显著降低。本研究为进一步探索非生物胁迫诱导植物基因表达的分子机制奠定了基础。
- 孟大伟王悦李沛璇赵宇威周瑶韩玉郎晨婧金太成杨丽萍
- 关键词：干旱诱导
- 利用AH1基因的遗传转化改良紫花苜蓿耐盐性被引量：6
- 2016年
- 由于盐胁迫严重限制了苜蓿的产量,研究构建了沙打旺(Astragalus adsurgens Pall)解螺旋酶基因AH1的植物表达载体p Cambia-AH1,并利用农杆菌介导法将目的基因转化到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中,旨在获得抗盐胁迫能力强的转基因植株。半定量RT-PCR检测和Northern杂交表明AH1基因在5个转基因株系中稳定表达。在盐胁迫条件下,与野生型对照植株相比,AH1转基因株系对中度盐胁迫(200 mmol/L Na Cl)具有较强的耐受性。而且,在中度盐胁迫条件下(200 mmol/L Na Cl),转基因植株累积了大量的游离脯氨酸和可溶糖。研究表明AH1基因可以改善植物盐渗透调节能力,从而导致了AH1转基因植株的抗盐胁迫能力的提高。
- 金太成孟大伟王悦杨丽萍
- 关键词：紫花苜蓿转基因苜蓿耐盐性
- 种子真空侵染法遗传转化体系的建立与优化被引量：4
- 2019年
- 针对植物遗传转化体系中周期长、表达效率低等的局限性,在拟南芥中建立并优化了一种新的遗传转化体系,称为发芽种子真空侵染法。以发芽种子作为真空侵染的材料,在拟南芥中成功地表达了β-葡萄糖苷酸酶(β-Glucuronidase,GUS),并对影响基因表达的侵染条件进行了优化。结果表明:当农杆菌细胞浓度(OD600)为1.2,真空泵的压强为0.07 MPa时,植物中GUS基因的表达效率更高。RT-PCR检测结果表明,利用这种体系在紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中有效表达了外源基因GUS。这种体系具有快速和高效的优势,为农杆菌介导的植物遗传转化体系提供了新的途径。
- 杨丽萍王悦孟大伟吴艳菊金太成
- 关键词：拟南芥
- 病毒抑制子HCPro诱导拟南芥中YUC1的表达
- 2020年
- 生长素在植物的生长发育过程中发挥重要作用,病毒侵染影响宿主生长素的积累。本研究揭示了病毒抑制子HCPro诱导生长素生物合成基因表达的分子机制。利用农杆菌介导的叶片侵染法在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中瞬时表达了报告基因GUS和病毒抑制子HCPro。结果证实,HCPro能够诱导YUC1基因启动子DNA去甲基化而激活其基因表达,为病毒与宿主互作的分子机制研究提供帮助。
- 金太成郎晨婧王悦吴艳菊孟大伟杨丽萍
- 农杆菌介导的苜蓿遗传转化及PDH45转基因苜蓿耐盐性被引量：2
- 2018年
- 耐盐性基因的遗传转化能够提高植物的抗盐胁迫能力,有效解决盐胁迫抑制植物生长的问题。本研究中紫花苜蓿(Medicago sativa)被作为植物材料,利用农杆菌介导的叶盘转化法将PDH45基因转入紫花苜蓿中。影响遗传转化效率的各种条件被优化,包括农杆菌菌液浓度的优化、侵染时间的优化和选择培养基中卡那霉素浓度的优化。采用半定量(reverse transcription-PCR,RT-PCR)对PDH45转基因苜蓿进行了检测,结果表明转基因植株中PDH45基因均表达。在Na Cl浓度为50 mmol/L、100 mmol/L、150 mmol/L、200 mmol/L条件下,对PDH45转基因植株进行了耐盐性检测实验,结果表明中度盐胁迫150 mmol/L NaCl条件下,PDH45转基因植株表现出较强的耐受能力。本研究通过实验条件的优化,我们快速地获得了PDH45转基因苜蓿,为耐盐性转基因苜蓿的应用和推广提供了研究基础。
- 金太成刘雨晴许亚男孟大伟周晓梅杨丽萍
- 关键词：紫花苜蓿盐胁迫
