张雪梅
- 作品数：8 被引量：58H指数：4
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省教育厅重点科研项目安徽省年度重点科研项目更多>>
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- 鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究被引量：26
- 2018年
- 为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况和药物敏感性,本研究对广东省、山东省、江苏省等地区疑似鸭疫里默氏杆菌病的病料进行病原分离和鉴定,并测定分离株对抗菌药物的敏感性。结果显示,共鉴定到46株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型、10型和15型菌株依次为9株、25株、1株和1株,未定血清型菌株10株;RA分离株普遍对林可霉素、多粘菌素和诺氟沙星耐药,表明RA分离株对临床常用药出现了不同程度的耐受;易感鸭的动物回归试验能够复制出典型的原始病例,且可从死亡雏鸭中分离到同源菌株。该研究结果为鸭疫里默氏杆菌病疫苗选用和临床用药提供了科学的参考依据。
- 任晓梅王小兰韩文龙张雪梅张雪梅李涛李涛丁铲
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌耐药性血清型
- 血清2型鸭疫里默氏杆菌脂多糖单克隆抗体的研制及特性鉴定被引量：2
- 2019年
- 【背景】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可感染雏鸭、鹅、火鸡等多种禽类,引起急性或慢性传染病。RA血清型众多且各血清型之间缺乏有效的交叉保护。细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)位于革兰氏阴性菌细胞壁的外侧,其组成和结构变化决定了细菌表面抗原决定簇的多样性。【目的】制备血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体并对其特性进行研究。【方法】以血清2型RA NJ3株免疫BALB/c小鼠,细胞融合后以RA NJ3株LPS作为包被抗原,筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过体内诱生腹水法制备抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单克隆抗体效价,玻片凝集试验和Westernblot检测单抗特异性。【结果】获得两株能稳定分泌抗血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为8G5和8G10;两株单抗的亚型均为IgM/κ链。ELISA结果表明,8G5和8G10腹水效价分别为1:32 000和1:16 000。Western blot结果显示,两株单抗仅与血清2型RA菌株发生特异性反应,而与其他血清型RA菌株和禽源致病菌无反应性。【结论】研究获得的单克隆抗体具有良好的反应性和血清型特异性,可用于RA致病机制的基础研究和进一步建立RA血清型快速检测方法。
- 张雪梅王小兰王小兰陈宗超王桂军王桂军
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体免疫学特性脂多糖
- 鸭疫里默氏杆菌OmpA/motb蛋白的表达纯化及免疫学特性分析被引量：2
- 2018年
- 本研究对血清1型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)CH3株的ompA/motb基因核苷酸序列及其蛋白进行生物学信息分析,用PCR技术扩增获得去除信号肽编码区段的ompA/motb基因,并构建重组表达质粒pET30a-OmpA/mtob,成功表达分子量约为55 kDa的重组蛋白rOmpA/motb。Western blot结果显示,rOmpA/motb能与血清1、2、10和15型RA阳性血清发生特异性反应,表明rOmpA/motb具有交叉免疫原性。以纯化的rOmpA/motb免疫新西兰大白兔,经3次免疫后兔血清中抗OmpA/motb蛋白的抗体效价为1:256 000;Western blot结果显示OmpA/motb兔多抗可与血清1型、2型、10型和15型RA菌株发生特异性结合反应,与其他菌株无反应性。本研究制备的RA OmpA/motb多克隆抗体具有良好的反应性及特异性,为进一步研究OmpA/motb蛋白的免疫学功能及建立鸭疫里默氏杆菌病的诊断方法奠定了基础。
- 张雪梅王小兰王小兰丁铲丁铲李涛李涛王桂军
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌多克隆抗体免疫学特性
- 口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达被引量：9
- 2016年
- 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 宫晓华殷冬冬王瑞唐井玉周晓雅梅楠张雪梅兰梦蝶陈鹏王勇王桂军
- 关键词：B2L基因原核表达
- 3株鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的制备及特性鉴定
- 2022年
- 鸭疫里默氏杆菌(RA)病,是家禽中主要的细菌性传染病之一,血清型复杂且各血清型间缺少交叉免疫保护,其中血清1型、2型、10型是国内优势血清型。外膜蛋白A(OmpA)是RA的毒力因子之一,在不同血清型RA中保守性良好。用OmpA蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞SP2/0融合后用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,腹腔注射BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过间接ELISA检测单克隆抗体效价及稳定性,秋水仙素法进行染色体分析,Western blot和玻片凝集试验鉴定单克隆抗体特异性。获得3株稳定分泌抗RA OmpA的单克隆抗体,分别命名为2D5、2A6、4H8;3株单克隆抗体的亚型均为IgG2a,腹水效价均为1∶2048000,均与鸭疫里默氏杆菌血清1型RA-CH3、血清2型RA-NJ3、血清10型RA-HXb2发生特异性反应,而与其他禽源致病菌不发生交叉反应。本研究成功研制的3株单克隆抗体具有良好的菌种特异性,有助于RA致病机理和RA快速诊断试剂盒的研制。
- 韩文龙张雪梅张雪梅王小兰
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体外膜蛋白特异性
- 鸭疫里默氏杆菌OmpA/motb蛋白的表达纯化及免疫学特性分析
- 本研究对血清1型鸭疫里默氏杆菌CH3株的ompA/motb基因核苷酸序列及其蛋白进行生物学信息分析后,用PCR技术扩增获得去除信号肽编码区段的ompA/motb基因,并构建重组表达质粒pET30a-OmpA/mtob,成...
- 张雪梅王小兰任晓梅丁铲窦亚峰李涛王桂军于圣青
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌病菌感染
- 新型鸭源细小病毒安徽株AH-D15株的分离鉴定被引量：12
- 2016年
- 为确定安徽省某鸭场发生的以雏鸭发育迟缓、鸭喙萎缩、舌头外伸下弯为特征的疾病病因,本研究利用PCR对病鸭样品进行检测,结果扩增出鹅细小病毒(GPV)特异性目的片段。将PCR阳性病料组织样品接种11日龄樱桃谷鸭胚,盲传3代后,可致鸭胚胚体出血严重,并且鸭喙畸形,证实分离到一株鸭源细小病毒(命名为AH-D15株)。利用第3代尿囊液感染2日龄健康樱桃谷肉鸭,2周后感染鸭出现短喙症状,并从鸭脑、肾、脾、胰腺和肝脏组织内检测到病毒。将分离病毒株的VP3核苷酸序列与Gen Bank中登录的GPV和番鸭细小病毒进行比对,结果表明AH-D15株与德国的VG32/1株和匈牙利的virulent B株亲缘关系最近,同源性分别为96.3%和96.5%。上述结果表明从病鸭体内分离到的鸭细小病毒可能来源于GPV,因此为该病的防控提供实验依据。
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- 关键词：樱桃谷鸭
- 鸡传染性喉气管炎病毒安徽株AH-XY15的分离鉴定被引量：7
- 2016年
- 安徽省某鸡场120日龄蛋鸡发生疑似鸡传染性喉气管炎（ILT）,根据Gen Bank发表的鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）株g D基因设计合成1对特异性引物,从发病鸡喉头及其分泌物中扩增出1 134 bp大小片段。将病鸡喉头气管及其分泌物处理后接种SPF鸡胚,接种120 h后在绒毛尿囊膜（CAM）上形成典型痘斑,证实分离到1株鸡传染性喉气管炎病毒,命名为AH-XY15株。应用鸡胚传代的第4代病毒感染5日龄健康麻羽鸡,结果感染鸡出现了典型ILT临床症状,并能够从发病鸡喉头分泌物检出ILTV。应用PCR扩增分离株毒力基因TK基因和g B基因,序列分析显示,AH-XY15分离株TK、g B基因的核苷酸序列与国内WG株、国外USDA株以及国内疫苗株K317株同源性均在99%以上,氨基酸序列同源性在97%-99.8%之间。
- 王瑞殷冬冬周晓雅梅楠张莉张雪梅周祺王勇王桂军
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒
