幽门螺杆菌多重耐药株hefA基因表达的检测与分析 被引量:5 2015年 目的了解hefA外排基因表达与贵阳市幽门螺杆菌(Hp)多重耐药的关系。方法提取耐3种抗生素的多重耐药菌株(10株)、敏感菌株(6株)及质控菌株SS1的基因组DNA,PCR扩增hefA基因片段,PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测后测序,将测序基因片段序列输入NCBI中进行BLAST比对;利用TRIzol试剂提取上述细菌的RNA并逆转录成cDNA,以16sRNA为内参基因,通过实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测hefA基因和内参基因的CT值,通过比较2-ΔΔCT判断多重耐药菌株和敏感菌株hefA基因表达的差异,以两小样本t检验进行统计学分析。结果 2%琼脂糖凝胶电泳显示,6株敏感菌和10株多耐药菌及SS1hefA基因PCR产物均约140bp,测序显示受试菌hefA基因序列与SS1菌株序列的一致性大于96%;RT-PCR检测hefA外排基因的表达,敏感菌株的2-ΔΔCT为0.895±0.540,多重耐药菌株的2-ΔΔCT为3.387±1.597,差异无统计学意义(t=9.399,P<0.05)。结论 hefA外排基因高表达是贵阳地区Hp多重耐药的机制之一。 王欢 毕红燕 潘科 綦廷娜 毕雅坤 王菲 陈峥宏关键词:幽门螺杆菌 多重耐药 实时荧光定量PCR 诺氟沙星对幽门螺杆菌耐药菌株的筛选作用 目的:观察不同浓度诺氟沙星对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)耐药菌株的筛选作用。方法:采用琼脂稀释法,对Hp诺氟沙星敏感菌株进行MIC,MPC及MSW的测定,对亲本菌株及药物筛选的耐药菌株进行MI... 杨廷秀 陈峥宏 毕红燕 毕雅坤关键词:诺氟沙星 GYRA基因 MIC MPC MSW 文献传递 诺氟沙星对幽门螺杆菌耐药菌株的筛选作用 被引量:1 2014年 目的观察不同浓度诺氟沙星对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)耐药菌株的筛选作用。方法采用琼脂稀释法对Hp诺氟沙星敏感菌株进行MIC、MPC及MSW的测定,对亲本菌株及药物筛选的耐药菌株进行MIC测定及gyrA基因喹诺酮耐药决定区的测序与分析。结果采用琼脂稀释法测得9株Hp诺氟沙星敏感菌株的平均MIC值为0.67μg/ml,平均MPC值为13.3μg/ml,MSWmin为3.75μg/ml,MSWmax为31.875μg/ml。经诺氟沙星的筛选共获得4株耐药菌株,与亲本菌株相比,耐药菌株的MIC增高16-256倍。耐药菌株与亲本菌株gyrA基因片段碱基序列一致。结论诺氟沙星在突变选择窗浓度范围内可筛选出发生耐药性变异的Hp菌细胞并富集扩增形成耐药菌株,耐药菌株的形成可能还存在除gyrA基因喹诺酮耐药决定区突变之外的机制。 杨廷秀 潘科 綦廷娜 毕红燕 毕雅坤 陈峥宏关键词:诺氟沙星 GYRA基因 MIC MPC MSW 65株幽门螺杆菌对氟喹诺酮药物的耐药特征 目的:了解幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)临床菌株对诺氟沙星和左氧氟沙星的敏感性及其gyrA基因突变特征。方法:1、采用界值法检测Hp临床菌株对诺氟沙星和左氧氟沙星的敏感性;选取Hp诺氟沙星和左氧... 陈峥宏 杨廷秀 毕红燕 毕雅坤 綦廷娜 吴晓娟关键词:幽门螺杆菌 GYRA基因 文献传递 质子泵抑制剂与抗生素对幽门螺杆菌的联合抗菌作用 被引量:6 2014年 目的:了解抗生素和质子泵抑制剂联合应用对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的联合抗菌效应.方法:采用界值法检测H.pylori临床菌株对克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林的敏感性,选取H.pylori克拉霉素敏感菌株(n=5)和耐药菌株(n=5)、左氧氟沙星敏感菌株(n=5)和耐药菌株(n=5)或阿莫西林敏感菌株(n=5)和耐药菌株(n=5),采用棋盘格法检测3种抗生素分别与两种质子泵抑制剂(奥美拉唑、雷贝拉唑)联合应用对H.pylori的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的影响,通过公式计算FIC指数(fractional inhibitory concentration index,FICI),判断药物联合抗菌效应;比较奥美拉唑和雷贝拉唑分别与3种抗生素联合应用时的FICI,采用两小样本t检验的方法进行统计学处理.结果:克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林分别与奥美拉唑、雷贝拉唑配伍对敏感菌株和耐药菌株的联合抗菌作用FICI均<0.75;雷贝拉唑和左氧氟沙星对敏感菌株的联合抗菌作用FICI比奥美拉唑和左氧氟沙星的联合抗菌试验的FICI小;雷贝拉唑和阿莫西林对耐药菌株的联合抗菌试验FICI比奥美拉唑和阿莫西林的联合抗菌试验的FICI小.结论:(1)奥美拉唑或雷贝拉唑分别与克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林联合应用均有协同抗菌作用;(2)雷贝拉唑和左氧氟沙星对敏感株的联合抗菌作用比奥美拉唑和左氧氟沙星的联合抗菌作用强;(3)雷贝拉唑和阿莫西林对耐药菌株的联合抗菌作用比奥美拉唑和阿莫西林的联合抗菌作用强. 毕红燕 陈峥宏 綦廷娜 王菲 毕雅坤 王琼关键词:幽门螺杆菌 奥美拉唑 雷贝拉唑 抗生素