王贵平
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PCR快速鉴定毕赤酵母重组子几种模板制备方法的比较
- 2014年
- 为了筛选出简单、快速、准确、稳定的毕赤酵母重组子鉴定技术,试验采用直接法、微波炉煮菌液法、煮-冻-煮法、端粒酶(TE)/0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液处理菌体法、Lysis Buffer处理菌液法和蜗牛酶处理菌液法6种方法制备毕赤酵母重组子DNA模板,进行PCR扩增效果的比较研究。结果表明:TE/0.1%SDS溶液处理菌液法和Lysis Buffer处理菌液法制备的酵母重组子DNA模板进行PCR可取得理想的结果;其他4种方法制备的酵母重组子DNA模板PCR结果不稳定。说明TE/0.1%SDS溶液处理菌液法耗时短、试剂简易、操作过程简便,且鉴定结果稳定,可以作为PCR鉴定毕赤酵母重组子DNA模板的首选快速制备方法。
- 赖芳芳李中圣赵焱罗钧王贵平李守军刘宇
- 关键词：毕赤酵母重组子
- 恒温热隔绝式PCR技术的原理与应用被引量：7
- 2017年
- 由于常规PCR所使用的加热机制为热传导的热循环仪,需要一个精密的数字控制器来快速加热和冷却样品。近年来,越来越多的研究致力于开发一种快速、便携式的核酸检测PCR平台。而自然对流作为另一种热转换方式,能促进液体自发反复循环以提供工作所需的变性、退火和延伸温度,在核酸检测领域有很大的应用前景。恒温热隔绝式PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)就是采用Rayleigh-Be′nard自然对流原理,利用仪器底部单一热源对特殊聚碳酸酯毛细反应管底部的紫铜圈接触加热,毛细管上部置入隔热挡板,上下的温度差从而使毛细管内部流体对流自发形成可供PCR扩增反应的连续的温度梯度,LED屏上直接显示检测结果。与传统的PCR检测方法相比,具有操作简便、快速高效、特异性强、仪器成本低等优点,已开始运用于临床各种病原体的检测。
- 王娟卞国志卞国志王贵平
- 关键词：聚合酶链反应
- 鸭坦布苏病毒全长E蛋白可溶性表达及免疫原性分析被引量：2
- 2019年
- 鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)引起的一种以产蛋量和采食量严重下降为主要特征的传染病。应用RT-PCR方法扩增DTMUV GDHD2014-3毒株的囊膜(E)蛋白全基因序列,并将其克隆至原核表达载体pMAL-c5x,构建重组表达质粒E-pMAL。将其转化E.coli BL21感受态细胞,经诱导表达条件优化,在30℃条件下IPTG诱导,可溶性表达重组的全长E蛋白(rf E),大小约110 ku。用Amylose Resin对目的蛋白进行纯化,并将纯化的rf E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆血清抗体。经Nu-PAGE以及Western blot分析,成功实现rf E蛋白可溶性表达,并能与DTMUV灭活疫苗免疫鸭血清多抗产生特异性反应。间接免疫荧光试验结果表明,rf E蛋白免疫小鼠获取的多克隆血清抗体能与DTMUV反应。实现了rf E蛋白的可溶性表达及纯化,并验证rf E蛋白具有良好的免疫原性,为DTMUV的亚单位疫苗的研制以及相关诊断试剂的开发奠定了基础。
- 龚凤平冯晓声王伟罗梦萍马海彬王贵平袁建丰
- 关键词：可溶性表达免疫原性分析
