许琼冠
- 作品数：22 被引量：77H指数：4
- 供职机构：海南医学院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- EGFL7基因RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定（英文）
- 2016年
- 目的：构建人类表皮生长因子域7（EGFL7）基因RNA干扰（RNAi）重组慢病毒表达载体。方法：参照小分子干扰RNA的设计原则,应用Oligo Designer 3.0软件设计三条靶向人EGFL7基因的RNA干扰序列（hEGFL7-RNAi）,并将其分别插入含有绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pLV3中,获得重组质粒,与包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE和pMD2G共同转染293T细胞,包装产生重组慢病毒,培养72 h后,应用qRT-PCR检测慢病毒感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后靶基因mRNA的水平,以评价其基因沉默效果。结果：筛选出3条人EGFL7基因的RNAi序列,分别包装出重组慢病毒,其滴度分别为1×10^8、2×10^8和5×10^8TU/mL,将其转染入HUVEC后,EGFL7mRNA表达均受到明显抑制（P〈0.05）。结论：成功筛选出三条针对人EGFL7基因的RNAi有效靶序列,并成功构建重组慢病毒表达载体,证明该序列可沉默HUVECs中EGFL7基因的表达。
- 王爱岳李强许琼冠刘达远徐鹏翔余丹
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- CTP介导的EGFRvⅢ肽疫苗诱导特异性免疫应答抑制脑胶质瘤的研究被引量：1
- 2022年
- 目的:探索CTP修饰的EGFRvⅢ多肽疫苗是否可激活体内抗肿瘤免疫应答并抑制胶质瘤生长。方法:qPCR检测胶质瘤患者肿瘤和癌旁组织EGFR和EGFRvⅢ表达;荧光显微镜观察多肽疫苗CTP-V2在树突状细胞(DCs)中的定位情况;流式细胞术检测负载多肽疫苗DCs与CD8^(+)T细胞共孵育后T细胞增殖及CD69表达;体内抑瘤实验检测CTP-V2的体内抗肿瘤活性;免疫组织化学检测T细胞肿瘤浸润及肿瘤细胞凋亡情况。结果:qPCR结果显示,胶质瘤患者肿瘤组织中EGFR表达较癌旁组织显著升高(P<0.001),肿瘤组织EGFR和EGFRvⅢ表达呈正相关(R=0.58),且EGFR和EGFRvⅢ表达与胶质瘤患者不良预后相关;显微镜观察显示,CTP-V2可有效定位于DCs胞质区域;流式检测结果表明负载CTP-V2的DCs较负载V2的DCs可更显著地刺激CD8^(+)T细胞增殖(P<0.000 1)和CD69表达(P<0.000 1);小鼠移植瘤模型显示,CTP-V2可显著抑制胶质瘤生长(P<0.01),同时可明显增加T细胞肿瘤浸润(P<0.001),促进肿瘤细胞凋亡(P<0.001)。结论:CTP-V2可有效激活机体抗肿瘤免疫应答,抑制胶质瘤生长,可能是治疗胶质瘤的新策略。
- 许琼冠欧阳一彬谢镇明
- 关键词：胶质瘤CTP多肽疫苗
- EGFL7基因shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定
- :利用基因重组技术构建LV3-hEGFL7-shRNA慢病毒表达载体.方法:设计靶向人EGFL7基因的小发卡RNA(shRNA)序列,将hEGFL7-shRNA基因片段连接到慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+Puro中...
- 李强许琼冠刘达远徐鹏翔
- 关键词：慢病毒基因重组
- 血管栓塞介入和颅内夹闭术治疗世界神经外科联盟Ⅳ~Ⅴ级动脉瘤性蛛网膜下腔出血的回顾性队列研究被引量：4
- 2022年
- 目的:探讨血管栓塞介入和颅内夹闭术在世界神经外科联盟(World Federation of Neurosurgery,WFNS)Ⅳ~Ⅴ级动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmal subarachnoid hemorrhage,aSAH)外科治疗中的临床获益差异。方法:回顾性分析2019年4月至2021年9月在琼海市人民医院神经外科住院治疗的134例WFNSⅣ~Ⅴ级aSAH患者相关资料,依据接受治疗手段不同,分成栓塞介入组(n=64)与颅内夹闭组(n=70),对两组手术情况和术后3个月随访情况进行比较。结果:栓塞介入组手术时间、住院时间均短于颅内夹闭组(均P<0.05),脑血管痉挛(cerebral angiospasm,CVS)为4.69%、并发症总发生率为10.94%,均低于颅内夹闭组的15.71%、25.71%(均P<0.05)。术后3个月,栓塞介入组预后良好率为70.31%,高于颅内夹闭组的52.86%(P<0.05),认知障碍发生率为45.31%,低于颅内夹闭组的62.86%(P<0.05)。结论:与颅内夹闭术治疗WFNSⅣ~Ⅴ级aSAH相比,血管栓塞术不仅具有节省手术耗时、缩短住院时间和降低CVS等并发症的优点,而且在改善患者近期预后和减少认知损害方面也具有明显优势,可提高临床获益。
- 王爱珠何珠茹曾维培梁琬苡许琼冠
- 关键词：动脉瘤性蛛网膜下腔出血回顾性队列研究
- 长链非编码RNA H19与高级别脑胶质瘤替莫唑胺抵抗的关系及其相关机制研究被引量：4
- 2018年
- 目的探究长链非编码RNA H19(LNC H19)与胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)抵抗的关系。方法收集正常脑组织(正常组)、初发(初发实验组)及复发高级别脑胶质瘤的组织样本(复发实验组)。以1,2,4,8μg·m L^(-1)TMZ分别诱导U251细胞并维持正常生长1周,构建抵抗U251 TMZ抵抗细胞系(U251-TR),U251细胞以等体积的0.9%Na Cl处理,逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测组织及细胞中LNC H19的表达以及细胞中06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA的表达。慢病毒转染构建稳定干扰LNC H19的U251-TR细胞系(U251-TRsi LNC H19),以MTT法验证U251-TR细胞并观察细胞TMZ半抑制浓度(IC_(50)值)的变化;以免疫印迹技术检测细胞中MGMT蛋白的表达。结果复发实验组、初发实验组和正常组的LNC H19表达量分别为0.26±0.02,0.19±0.01,0.12±0.02,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。U251-TR及U251细胞IC_(50)值分别为(10.2±1.3),(2.8±0.2)μg·m L^(-1),组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。U251-TR si LNC H19细胞和U251-TR细胞TMZ的IC_(50)值分别为(6.1±0.6),(10.7±1.5)μg·m L^(-1),组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。U251-TR和U251细胞LNC H19表达分别为0.08±0.01,0.03±0.01,U251-TR和U251细胞MGMT mRNA表达分别为0.57±0.11,0.31±0.07,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。U251-TR和U251细胞MGMT蛋白表达水平分别为(0.85±0.16),(0.27±0.07)DPI,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LNC H19是促进TMZ抵抗的关键因子。
- 徐鹏翔李强许琼冠张彩彩
- 关键词：替莫唑胺化疗抵抗
- 抑制AMPK介导上调Bim在大鼠蛛网膜下腔出血后早期皮层神经元凋亡中的影响
- 2023年
- 观察抑制AMPK介导上调Bim对大鼠SAH后早期皮层神经元凋亡的影响。方法 选择108只SPF级雄性大鼠,同一条件饲养1周后建立SAH模型,将大鼠随机分为假手术组、药物干预组、盐水对照组。进行AMPK mRNA、p-AMPK组织细胞定位,检测造模后不同时间点额底皮质相关蛋白表达情况。结果 SAH造模后AMPKα mRNA表达与盐水对照组、假手术组差异显著(P<0.05);SAH组p-AMPK、Bim、caspase-3蛋白在造模后不同时段呈高表达,组间比较P<0.05;与假手术组神经行为学评分相比,SAH组大鼠明显较低,经过Compound C干预,大鼠神经行为评分提升。结论 AMPK通路在大鼠SAH早期脑损伤所致皮层神经元凋亡中有参与作用,抑制AMPK介导上调Bim,可对神经元起到保护作用。
- 许琼冠付宙锋何少宇龙丁辉
- 关键词：大鼠蛛网膜下腔出血CASPASE-3蛋白
- 胶质瘤中HuR通过上调PTBP1表达激活Akt通路对胶质瘤细胞的作用研究被引量：1
- 2021年
- 目的探讨人类抗原R(HuR)在胶质瘤中的作用及其可能的作用机制。方法收集胶质瘤组织和正常对照组织各21例。体外培养正常胶质细胞株SVGp12和人胶质母细胞瘤来源的细胞株U251,qRT-PCR检测组织和细胞中HuR和多嘧啶结合蛋白1(PTBP1)mRNA表达;Western Blot检测组织和细胞中HuR、PTBP1、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和蛋白激酶B(Akt)蛋白表达;RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测HuR对PTBP1的调控作用;CCK-8检测细胞活力;Ed U实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,胶质瘤组HuR mRNA和蛋白表达、PTBP1的mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与SVGp12组相比,U251组细胞中HuR mRNA和蛋白表达、PTBP1 mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05)。HuR通过结合PTBP1 mRNA调节PTBP1的表达。空白组和si-NC+oe-NC组细胞中各指标差异无统计学意义(均P>0.05)。与si-NC+oe-NC组相比,si-HuR组+oe-NC组细胞中HuR、PTBP1 mRNA和蛋白表达均显著降低(均P<0.05),48 h和72 h的细胞活力以及细胞增殖能力显著降低(均P<0.05),细胞凋亡显著升高(P<0.05),p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05);与si-HuR+oe-NC组相比,si-HuR+oe-PTBP1组细胞中HuR mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),PTBP1 mRNA和蛋白表达显著升高(均P<0.05),48 h和72 h的细胞活力以及细胞增殖能力显著升高(均P<0.05),细胞凋亡显著降低(P<0.05),p-Akt/Akt蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论HuR可能通过上调PTBP1表达激活Akt通路促进胶质瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。
- 许琼冠欧阳一彬谢镇明龙丁辉何少宇
- 关键词：胶质瘤细胞
- 大鼠脑出血后HIF-1α表达与血脑屏障通透性相关分析
- 2012年
- 目的探讨血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白的表达变化与血脑屏障(BBB)通透性之间的关系。方法SD大鼠56只随机分假手术对照组(sham组)和脑出血组(ICH组)。ICH组又分为6h组、24h组、3d组、7d组和14d组,每组8只。采用自体血脑内注射法建立脑出血动物模型,测定血肿周边脑组织中伊文思蓝(EB)外渗量,以EB外渗量反映BBB通透性的变化,以免疫组化方法检测脑出血后不同时间血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白表达情况,并应用干湿比重法测定脑组织含水量。结果脑出血后3d内,BBB通透性和脑组织含水量均呈进行性增加,并于出血后第3d达到高峰,此后逐渐下降,对照组与出血组脑组织含水量及BBB通透性比较差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血组HIF-1α蛋白阳性表达率60.42%(29/48),对照组HIF-1α蛋白阳性表达率为0%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05);脑出血后,HIF-1α蛋白表达于出血后3d达到高峰并维持到第7d,脑出血后不同时间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α的表达变化与BBB通透性和脑组织含水量均呈正相关(P<0.05)。结论HIF-1α在血肿周边脑组织中的表达与BBB通透性改变及脑水肿的形成和发展密切相关。
- 王爱岳李强周治平许琼冠
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α血脑屏障脑出血脑水肿
- 不同部位损伤对颅脑外伤病人认知功能的影响被引量：18
- 2019年
- 目的分析不同部位损伤对颅脑外伤病人认知功能的影响,以期为病人的早期诊治提供切实可靠的临床依据。方法对海南医学院第二附属医院神经外科收治的292例颅脑外伤病人,应用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)进行认知功能评估,对不同损伤部位病人的认知功能进行对比、分析。结果 292例病人中认知功能障碍总发生率为67.81%,其中不同部位病人认知功能障碍发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),以丘脑组发生率最高90.63%,额叶组次之89.19%,而小脑组发生率最低36.67%。不同组别之间MoCA总分、注意与集中、执行功能、语言、记忆等方面比较差异有统计学意义(P<0.05),其中额叶组的执行功能评分显著低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05),枕叶组、顶叶组、丘脑组和基底节组显著低于其他组的记忆评分,差异有统计学意义(P<0.05),颞叶组注意与集中评分、语言评分均显著低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同部位颅脑损伤对认知功能的损害特点差异明显,MoCA认知功能评定对指导治疗和预后有积极的临床意义。
- 许琼冠
- 关键词：颅脑外伤颞叶枕叶额叶丘脑
- 类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建被引量：3
- 2019年
- 背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组,颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型,假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜;依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1,6,24h以及3,7,14d共6个亚组,每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后,取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组,建立颅脑损伤模型,颅脑损伤1h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002,每组6只。干预12h后取材检测。结果与结论:①RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测显示:颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调,且随损伤后时间的增加而上调,EGFL7在颅脑损伤3d达到最大(P<0.05),EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致,微血管生成数目在颅脑损伤7d到达最高;②大鼠颅脑损伤后1h颅内rAd-EGFL7微量注射12h后,损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P<0.05),同时pAkt、cyclinD1显著增加,FOXO1显著下降(P<0.05);③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12h后,EGFL7表达变化不明显,但CD34表达显著受抑制(P<0.05),同时微血管生成数目显著减少(P<0.05);④结果证实,EGFL7在脑损伤组织中表达上调,其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。
- 徐鹏翔李强许琼冠罗孟亚男成凯谢镇明付宙锋
- 关键词：CD34颅脑损伤脑损伤修复神经功能障碍
